【熱點】重組人源化膠原蛋白及其工藝雜質(zhì)的SEC分析方案

膠原蛋白是人體中含量豐富的結(jié)構(gòu)性蛋白質(zhì)之一，約占總蛋白量的 25%-30%，廣泛分布于皮膚、骨骼、軟骨、肌腱、血管等結(jié)締組織中。作為組織的 “建筑基石”，它不僅賦予皮膚彈性與張力，支撐表皮結(jié)構(gòu)，還在關(guān)節(jié)潤滑、傷口愈合、血管壁穩(wěn)定等生理過程中發(fā)揮關(guān)鍵作用。隨著生物工程技術(shù)的發(fā)展，重組人源化膠原蛋白憑借與人體天然膠原蛋白高度的序列同源性、優(yōu)異的生物相容性及低免疫原性，逐漸取代傳統(tǒng)動物源膠原蛋白，成為醫(yī)美填充、皮膚修復、組織工程等領(lǐng)域的核心材料。其中，重組人源化膠原蛋白Ⅲ型因更貼近年輕肌膚中膠原蛋白的構(gòu)成比例，在抗衰、嫩膚類產(chǎn)品中應用尤為廣泛。

基于此，本實驗采用Yarra SEC-2000 3um，7.8 x 300 mm 色譜柱（PN: 00H-4512-K0）建立 SEC 分離方法，對重組人源化膠原蛋白 Ⅲ 型（約 45KD）及其工藝雜質(zhì)（約 35KD）進行分離分析。實驗選用 50mM 磷酸鉀緩沖液+ 100mM氯化-鉀與乙腈 9:1 混合作為流動相，在 30℃柱溫、0.5 mL/min 流速下進行檢測。

 Yarra2000色譜圖

綠：45kD蛋白；紅：35kD蛋白；藍：5% 雜質(zhì)加標

結(jié)果令人振奮：膠原蛋白主峰峰形尖銳對稱，塔板數(shù)高達8932，對稱因子1.03，對于5% 加標雜質(zhì)的樣品，該方法實現(xiàn)了目標蛋白與雜質(zhì)的有效分離，分離度達1.35，積分結(jié)果能準確定量各組分占比，為工藝優(yōu)化與質(zhì)量控制提供了可靠數(shù)據(jù)支撐。