發(fā)酵管滅菌方法的常用分類與操作步驟及注意事項(xiàng)！

百歐博偉生物：發(fā)酵管（含培養(yǎng)基的試管，常用于微生物發(fā)酵試驗(yàn)）的滅菌需兼顧殺滅微生物（包括芽孢）和保護(hù)培養(yǎng)基成分穩(wěn)定性，常用方法如下：

一、高壓蒸汽滅菌法

適用于大多數(shù)含碳水化合物、蛋白質(zhì)等熱穩(wěn)定性較好的培養(yǎng)基（如糖發(fā)酵管、醇發(fā)酵管等）。

操作步驟：

1、裝量與密封：

發(fā)酵管內(nèi)培養(yǎng)基裝量一般為試管容量的 1/3~1/2，避免滅菌時(shí)溢出。

若含倒置小倒管（檢測(cè)產(chǎn)氣），需先將小倒管放入試管，確保其開(kāi)口朝下、浸沒(méi)在培養(yǎng)基中，再用棉塞或硅膠塞密封試管口（棉塞需用牛皮紙包裹，防止滅菌后污染）。

2、滅菌參數(shù)：

一般采用 121℃、103.4kPa（1.05kg/cm2）、15~20 分鐘。

若培養(yǎng)基中含易分解成分（如某些糖類濃度較高時(shí)），可適當(dāng)降低溫度（如 115℃、30 分鐘），避免成分破壞（如糖的焦化）。

3、排氣與滅菌：

將發(fā)酵管放入高壓蒸汽滅菌器，先打開(kāi)排氣閥，排盡冷空氣（確保滅菌器內(nèi)溫度真實(shí)達(dá)到設(shè)定值），再關(guān)閉排氣閥升壓、升溫，維持設(shè)定時(shí)間。

滅菌結(jié)束后，緩慢降壓至零，打開(kāi)排氣閥，取出發(fā)酵管。

4、冷卻處理：

取出后需直立放置，待其自然冷卻至室溫。若含倒置小倒管，冷卻過(guò)程中會(huì)因培養(yǎng)基收縮，使小倒管內(nèi)充滿培養(yǎng)基或形成負(fù)壓（無(wú)氣泡），確保后續(xù)產(chǎn)氣試驗(yàn)準(zhǔn)確。

二、流通蒸汽滅菌法（局限性較大）

適用于不耐高溫的培養(yǎng)基（如含某些維生素、酶類的特殊發(fā)酵管），但滅菌效果較差（無(wú)法殺滅芽孢），僅用于非嚴(yán)格無(wú)菌要求的場(chǎng)景。

操作步驟：

將發(fā)酵管放入流通蒸汽滅菌器（或蒸籠），100℃蒸汽下滅菌 30 分鐘。

為提高效果，可采用“間歇滅菌”：連續(xù) 3 天，每菌 30 分鐘，中間放置 37℃培養(yǎng)箱培養(yǎng)，使芽孢萌發(fā)為營(yíng)養(yǎng)體，次日再滅菌殺滅。

三、注意事項(xiàng)

1、避免過(guò)度滅菌：

長(zhǎng)時(shí)間高溫會(huì)破壞培養(yǎng)基成分（如糖類分解、pH 改變、指示劑失效），導(dǎo)致試驗(yàn)結(jié)果不準(zhǔn)（如假陰性）。

含小倒管的發(fā)酵管滅菌后需檢查：小倒管內(nèi)若有氣泡，需重新滅菌（因氣泡可能影響后續(xù)產(chǎn)氣判斷）。

2、無(wú)菌操作驗(yàn)證：

滅菌后隨機(jī)抽取部分發(fā)酵管，37℃培養(yǎng) 24~48 小時(shí)，觀察是否有雜菌生長(zhǎng)（如渾濁、變色），確保滅菌合格。

3、特殊培養(yǎng)基處理：

若培養(yǎng)基含高溫易破壞的成分（如抗生素、血清），需先將基礎(chǔ)培養(yǎng)基高壓滅菌，冷卻至 50~60℃時(shí)，無(wú)菌操作加入過(guò)濾除菌（0.22μm 濾膜）的敏感成分，再分裝成發(fā)酵管。

總結(jié)：高壓蒸汽滅菌法是發(fā)酵管的滅菌方式，需嚴(yán)格控制溫度、時(shí)間和排氣步驟，確保滅菌且培養(yǎng)基功能完好，為微生物發(fā)酵試驗(yàn)提供可靠的無(wú)菌環(huán)境。

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