北京慧德易教您怎樣選擇色譜柱

北京慧德易教您怎樣選擇色譜柱   

現(xiàn)代液相色譜中，分離效果好壞很大程度上取決于色譜填料的選擇。但是色譜填料的選擇范圍很寬，要做合適的選擇，必須對(duì)此有一定的認(rèn)識(shí)和了解。

1.硅膠基質(zhì)填料

（1）正相色譜    正相色譜用的固定相通常為硅膠（Silica） 以及其他具有極性官能團(tuán)，如胺基團(tuán)（NH2APS）和氰基團(tuán)（CN,CPS）的鍵合相填料。

由于硅膠表面的硅羥基（SiOH）或其他極性基團(tuán)極性較強(qiáng)，因此，分離的次序是依據(jù)樣品中各組份的極性大小，即極性較弱的組份zui先被沖洗出色譜柱。

    正相色譜使用的流動(dòng)相極性相對(duì)比固定相低，如：正己烷（Hexane）、氯仿（Chloroform）、二氯甲烷（Methylene Chloride）等。

（2）反相色譜反相色譜用的填料常是以硅膠為基質(zhì)表面鍵合有極性相對(duì)較弱的官能團(tuán)的鍵合相。

反相色譜所使用的流動(dòng)相極性較強(qiáng)，通常為水、緩沖液與甲醇、乙腈等的混合物。

樣品流出色譜的順序是極性較強(qiáng)的組份zui先被沖洗出，而極性弱的組份會(huì)在色譜柱上有更強(qiáng)的保留。

常用的反相填料有：C18（ODS）、C8（MOS）、C4（butyl）、C6H5（Phenyl）等。

2.聚合物填料

聚合物填料多為聚苯乙烯-二乙烯基苯或聚甲基丙烯酸酯等，其主要優(yōu)點(diǎn)是在pH值為1~14均可使用。

相對(duì)于硅膠基質(zhì)的C18填料，這類(lèi)填料具有更強(qiáng)的疏水性；大孔的聚合物填料對(duì)蛋白質(zhì)等樣品的分離非常有效。

    現(xiàn)有的聚合物填料的缺點(diǎn)是相對(duì)硅膠基質(zhì)填料，色譜柱柱效較低。

3.其它無(wú)機(jī)填料

    其它HPLC的無(wú)機(jī)填料色譜柱也已經(jīng)商品化。由于其特殊的性質(zhì)，一般于特殊的用途。如，石墨化碳正逐漸成為反相色譜柱填料。這種填料的分離不同于硅膠基質(zhì)烷基鍵合相，石墨化碳的表面即是保留的基礎(chǔ)，不再需其它的表面改性。該柱填料一般比烷基鍵合硅膠或多孔聚合物填料的保留能力更強(qiáng)。石墨化碳可用于分離某些幾何異構(gòu)體，又由于在HPLC流動(dòng)相中不會(huì)被溶解，這類(lèi)柱可在任何pH與溫度下使用。氧化鋁也用于HPLC，氧化鋁微粒剛性強(qiáng)，可制成穩(wěn)定色譜柱柱床，其優(yōu)點(diǎn)是可在pH高達(dá)12的流動(dòng)相中使用。但由于氧化鋁與堿性化合物作用也很強(qiáng)，應(yīng)用范圍受到一定的限制，所以未能廣泛應(yīng)用。新型氧化鋯基質(zhì)色譜填料也可用于HPLC，商品化的僅有聚合物涂層的多孔氧化鋯微球色譜柱，應(yīng)用pH范圍1~14，溫度可達(dá)100℃。由于氧化鋁填料是zui近幾年才開(kāi)始研究，加之面臨的實(shí)驗(yàn)難度，其重要用途與優(yōu)勢(shì)尚在進(jìn)行中。

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