用Iodixanol分離人血液單核細胞

來源：廣州市默菲儀器有限公司 2013年05月07日 12:46

所需儀器：XL03RH型控溫離心機（低速冷凍離心機，可使用24*15ml離心管，水平轉(zhuǎn)子）

1）將30ml血液加到含有Na₂EDTA的抗凝管里（終濃度5.5mmol/L）

2）制備1.084g/cm³和1.065g/cm³ Iodixanol溶液

方法如下：

Iodixanol：60% Iodixanol溶液（Optiprep）

稀釋介質(zhì)：RPMI 1640 + 10%胎牛血清。

1.084g/cm³溶液：1.5ml 60% Optiprep + 4.5ml稀釋介質(zhì)

1.065g/cm³ 溶液：3ml 60% Optiprep + 13.4ml稀釋介質(zhì)

3）全血在570g離心15分鐘，棄去上層血漿，取出淡黃色層并與0.4體積的Optiprep混合。

4）把富含白細胞的血漿/ Optiprep混合物轉(zhuǎn)移到離心管，上面按順序加入2ml 1.084g/cm³溶液、4ml 1.065g/cm³ 溶液和0.5ml稀釋介質(zhì)。

5）用甩開吊籃轉(zhuǎn)子700g離心15分鐘。

6）降速過程中不制動，收集分界面處的細胞，并且稀釋介質(zhì)稀釋。

7）在400g離心6分鐘，把細胞懸浮于適當介質(zhì)里備用。

湖南湘立研制生產(chǎn)的幾款醫(yī)用離心機可以用來進行細胞分離，如DL5M/TDL5M兩種型號的低速冷凍離心機可用來進行干細胞實驗。XL03RH型控溫離心機（低速冷凍離心機）可用來進行溫度敏感型人體細胞分離。

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