ELISA新手操作實驗之前需要做哪些準備

　近些年來，免疫學分析方法發(fā)展很快，特別是在使用標記了的抗原和抗體的分析技術以后，使原來許多經(jīng)典的分析方法在敏感性和特異性方面都不能相比。ELISA試劑盒有著高特異性、靈敏性等優(yōu)點，接觸ELISA實驗的科研檢測員也越來越多，那么ELISA新手操作實驗之前需要做哪些準備?

　　①標本制備要規(guī)范，每份標本體積要按2-3個復孔以上的量制備(貯存)，盡量分裝做備份。短期內(nèi)無法實驗者，注意低溫保存。

　?、趥浜盟袑嶒烆~外所需物品，如試管、吸頭、移液器、離心機等。

　?、鄹鶕?jù)檢測標本數(shù)量確定所需試劑的量。

　?、馨凑f明書將所用試劑平衡至室溫，配制所需試劑。

　　⑤ 選擇抗體時選擇一個單抗和一個多抗進行配對;若選擇兩個單抗，必須識別不同表位的抗體;從同一家公司選擇抗體對。

　?、?ELISA實驗中為了確定*信號和zui低背景應將捕獲抗體(0.5-4μg/ml)和檢測抗體(0.25-2μg/ml)在預實驗中進行彼此相抗的滴定。同時，應包括在適當范圍內(nèi)的標準品的系列稀釋。按試劑說明書常規(guī)提供的范圍進行操作。

　　⑦一般待測抗原標準曲線的線性范圍的可通過將標準品做8次2倍系列稀釋從2000pg/ml到15pg/ml?？衫脴藴实腅LISA操作流程、放大試劑盒、第三類試劑、或改變酶底物系統(tǒng)可在一定范圍內(nèi)提高靈敏度。

　?、嗳羰褂眠^氧化物酶作為顯色系統(tǒng)，應嚴禁在洗液和稀釋液中加疊氮鈉，疊氮鈉可抑制過氧化物酶的活性。

　　⑨標準品的配制：對于每種細胞因子應仔細閱讀說明書，注意每批的細節(jié)。在使用細胞因子前，瞬時離心試劑瓶，盡可能多地收回其中的細胞因子。根據(jù)每批說明書中的細節(jié)，將凍干的細胞因子復溶。