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我能夠想到四個(gè)重要因素影響背景是亮還是暗（我的經(jīng)驗(yàn)來自生物學(xué)的組織/細(xì)胞免疫熒光染色實(shí)驗(yàn)）：
光圈。光圈開得大，顧名思義所有光信號(hào)包括背景信號(hào)都會(huì)增強(qiáng)。
曝光時(shí)間。光信號(hào)再強(qiáng)，你只選取其中很少一部分來成像，也能夠控制圖像中的信號(hào)強(qiáng)度。
樣品/玻片本身的自發(fā)熒光。
樣品的非特異性染色。
總體是一個(gè)所有檢測(cè)手段中共通的問題，即信噪比，信號(hào)與噪聲比率。
1，2對(duì)信噪比影響不大，在背景過強(qiáng)時(shí)很難通過調(diào)整1，2來解決問題。如果背景不存在過強(qiáng)問題，則通過1確保有用信號(hào)足夠強(qiáng)，通過2減低曝光時(shí)間至背景充分黑暗即可。
3，4才是控制信噪比的關(guān)鍵因素。自發(fā)熒光無法*避免，只能通過選取自發(fā)熒光較低的材料來控制，另外固定及染色過程中的一些試劑有可能影響樣本的自發(fā)熒光。非特異性染色是更為常見的造成背景問題的原因，通過優(yōu)化封閉條件，抗體/試劑用量，染色時(shí)長(zhǎng)與溫度等條件來調(diào)整。
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