細(xì)胞劃痕檢測(cè)

一、實(shí)驗(yàn)原理
細(xì)胞劃痕(wound healing)法是簡(jiǎn)捷測(cè)定細(xì)胞遷移運(yùn)動(dòng)和修復(fù)能力的方法，類似體外傷口愈合模型，在體外培養(yǎng)皿或平板培養(yǎng)的單層貼壁細(xì)胞上，用微量槍頭或其它硬物在細(xì)胞生長(zhǎng)的中央?yún)^(qū)域劃線，去除中央部分的細(xì)胞，然后繼續(xù)培養(yǎng)細(xì)胞至實(shí)驗(yàn)設(shè)定的時(shí)間，取出細(xì)胞培養(yǎng)板，觀察周邊細(xì)胞的生長(zhǎng)遷移能力，實(shí)驗(yàn)通常需設(shè)定正常對(duì)照組和實(shí)驗(yàn)組，實(shí)驗(yàn)組是加了某種處理因素或藥物、外源性基因等的組別，通過(guò)不同分組之間的細(xì)胞對(duì)于劃痕區(qū)修復(fù)能力的不同，可以判斷各組細(xì)胞的遷移與修復(fù)能力。
二、實(shí)驗(yàn)步驟
1、 所有要滅菌，直尺和marker筆在操作前紫外照射30min. .
2、先用marker筆在6孔板背后，用直尺比著，大約每隔0.5-1cm一道，橫穿過(guò)孔，每孔至少穿過(guò)5           條線。

3、在空中加入約5X105個(gè)細(xì)胞(具體數(shù)量因細(xì)胞不同而不同，掌握為過(guò)夜能鋪滿)，37C培養(yǎng)箱培              養(yǎng)。

4、第二天用10μ1槍頭比著直尺，與標(biāo)記線垂直的方向劃兩條平行線，槍頭要垂直，不能傾斜。
5、用PBS洗細(xì)胞3次，去除劃下的細(xì)胞，加入無(wú)血清培養(yǎng)基。
6、放入37°C 5% CO2培養(yǎng)箱，按0、6、12、24h倒置顯微鏡觀察，拍照。