腫瘤細(xì)胞Transwell

將Transwell小室放入培養(yǎng)板中，小室內(nèi)稱上室，培養(yǎng)板內(nèi)稱下室，上室內(nèi)盛裝 上層培養(yǎng)液，下室內(nèi)盛裝下層培養(yǎng)液，上下層培養(yǎng)液以聚碳酸酯膜相隔。我們將細(xì)胞種在上室內(nèi)，由于聚碳酸酯膜有通透性，下層培養(yǎng)液中的成分可以影響到上室內(nèi)的細(xì)胞，從而可以研究下層培養(yǎng)液中的成分對細(xì)胞生長、運(yùn)動等的影響。應(yīng)用不同孔徑和經(jīng)過不同處理的聚碳酸酯膜，就可以進(jìn)行共培養(yǎng)、細(xì)胞趨化、細(xì)胞遷移、細(xì)胞侵襲等多種方面的研究。當(dāng)然不同細(xì)胞其體積不同，具體選擇時(shí)要考慮到細(xì)胞大小。這里主要談幾種大家常用的實(shí)驗(yàn):
(1) 共培養(yǎng)體系:
小于3.0um孔徑條件下，細(xì)胞不會遷徙通過，因此，若研究不涉及細(xì)胞運(yùn)動能力，不需要細(xì)胞穿過聚碳酸酯膜，則應(yīng)選擇3.0μm以下孔徑。常用0.4、3.0um。我們實(shí)驗(yàn)室用的是0.4μm。將細(xì)胞A種于上室，細(xì)胞B種于下室，可以研究細(xì)胞B分泌或代謝產(chǎn)生的物質(zhì)對細(xì)胞A的影響。
(2)趨化性實(shí)驗(yàn):
可用5.0、8.0、12.0μm膜，上室細(xì)胞可穿過聚碳酸酯膜進(jìn)入下室，計(jì)數(shù)進(jìn)入下室的細(xì)胞量可反映下室成分對上室細(xì)胞的趨化能力。
①細(xì)胞B對細(xì)胞A的趨化作用:將細(xì)胞A種于上室，細(xì)胞B種于下室，可以研究細(xì)胞B分泌或代謝產(chǎn)生的物質(zhì)對細(xì)胞A的趨化作用。
②趨化因子對細(xì)胞的趨化作用:將細(xì)胞種于上室，下室加入某種趨化因子，可研究該趨化因子對細(xì)胞的趨化作用。

(3)腫瘤細(xì)胞遷移實(shí)驗(yàn):
常用8.0、12.0μm膜，上室種腫瘤細(xì)胞，下室加入FBS或某些特定的趨化因子，腫瘤細(xì)胞會向營養(yǎng)成分高的下室跑，計(jì)數(shù)進(jìn)入下室的細(xì)胞量可反映腫瘤細(xì)胞的遷移能力。

(4)腫瘤細(xì)胞侵襲實(shí)驗(yàn)常用8.0、12.0um 膜，原理與腫瘤細(xì)胞遷移實(shí)驗(yàn)類似。transwell侵襲實(shí)驗(yàn)，其實(shí)原理簡單地說就是用一層膜將高營養(yǎng)的培養(yǎng)液和低營養(yǎng)的培養(yǎng)液隔開，細(xì)胞放在低營養(yǎng)的培養(yǎng)液里，為了找吃的，細(xì)胞會往高營養(yǎng)的培養(yǎng)液里面跑，但是有膜擋著，所以要穿過膜才行。我們在膜上涂上一層基質(zhì)膠，模仿細(xì)胞外基質(zhì)，于是細(xì)胞要把基質(zhì)消化了才可以從低營養(yǎng)的培養(yǎng)液跑到高營養(yǎng)的培養(yǎng)液里面,后我們檢測高營養(yǎng)的培養(yǎng)液.里細(xì)胞量就可以知道細(xì)胞的侵襲能力了。