鉤端螺旋體IgG檢測試劑盒

鉤端螺旋體IgG檢測試劑盒（酶聯(lián)免疫法）

【產(chǎn)品名稱】

通用名稱：鉤端螺旋體IgG檢測試劑盒（酶聯(lián)免疫法）

英文名稱：Leptospira IgG ELISA Kit 

【產(chǎn)品規(guī)格】

96T

【預(yù)期用途】

試劑盒可用于定性檢測人血清或血漿中雙曲鉤端螺旋體IgG抗體。

【前言簡介】

鉤端螺旋體的臨床癥狀表現(xiàn)從輕微傷寒到肝腎嚴(yán)重受損的黃疸病。鉤體存在于嚙齒類動物和大部分的家畜身上，在腎小管內(nèi)寄生，然后從尿液中排出。人類感染來源于直接接觸已感染的動物（如獸醫(yī)，屠宰場工人或乳制品工人）或是被動物攜帶者污染的空氣（如農(nóng)業(yè)員），已證明有潛在感染風(fēng)險的動物接觸到的水用來洗澡或是游泳也會傳染。鉤體通過破損的皮膚，黏膜表面或是眼睛進(jìn)入宿主細(xì)胞，潛伏期在3-30天不等，但通常在10-12天時就會發(fā)現(xiàn)，在發(fā)病的第6天到第10天間就可檢測到抗體，3-4周內(nèi)達(dá)到高峰期，之后抗體水平會慢慢減少，但數(shù)年后仍可檢測到抗體

急性疾病的診斷可將以下因素考慮進(jìn)去，如流行病學(xué)因素，臨床癥狀，暴露于流行病地區(qū)和其他的實(shí)驗(yàn)室結(jié)果，急性疾病的診斷也可包括多數(shù)情況下實(shí)驗(yàn)室的陽性樣本的確診，此試驗(yàn)可診斷鉤端螺旋體的急性感染，但陽性樣本需通過其他方法進(jìn)一步確診

【檢測原理】

微孔板已包被經(jīng)純化的鉤端螺旋體抗原，第次孵育，樣品血清中的抗體與微孔板上的抗原進(jìn)行結(jié)合，洗去未結(jié)合的樣品，加酶聯(lián)物，與結(jié)合在孔內(nèi)的抗體結(jié)合，第二次洗滌后，加TMB底物液，若酶聯(lián)物存在，過氧化物酶就會催化反應(yīng)，溶液變藍(lán)，加終止液，由藍(lán)色變?yōu)辄S色，結(jié)果可直接目測或是酶標(biāo)儀檢測

【試劑盒組成成分】

微孔板         12×8

包被了鉤端螺旋體抗原

酶聯(lián)物         1×11ml

即用型、內(nèi)含HRP標(biāo)記的抗人IgG

陽性質(zhì)控       1×1ml

陰性質(zhì)控       1×1ml

底物液         1×11ml

即用型、內(nèi)含TMB

終止液         1×11ml

內(nèi)含1M的磷酸

洗滌液         1×25ml

20倍濃縮

稀釋液         2×30ml

所需材料（未提供）

1. 移液器

2. 去離子水

3. 量筒

4. 樣本稀釋管

5. 吸水紙

6. 酶標(biāo)儀（450nm和620-650nm）

【樣本處理】

此試劑盒可用于血清或血漿檢測，血清可在2-8℃下保存5天，-20℃下可保存更久，避免加熱滅活樣本，避免反復(fù)凍融

單一樣本的暴露評估：兩個樣本采自同一個人的不同時間，用于說明血清轉(zhuǎn)化情況。兩樣本在同一時間進(jìn)行檢測，建議采集樣本顯示無反應(yīng)或弱陽性的恢復(fù)期病人

【檢測方法】

試劑準(zhǔn)備

1. 實(shí)驗(yàn)前將所有試劑和樣本平衡至室溫，混勻。

2. 濃縮洗滌液可能在冰箱儲存時出現(xiàn)沉淀，當(dāng)放置室溫下后沉淀就會消失，將其混勻，確保配制稀釋前濃縮洗滌液中的沉淀全溶解，將1瓶濃縮洗滌液加入含有475ml去離子水的試管內(nèi)，混勻。

檢測步驟

1. 將實(shí)驗(yàn)所需的板條固定于板架上（兩個質(zhì)控品加上樣品）

2. 樣品血清用稀釋緩沖液以1:40比例進(jìn)行稀釋（例如：10µl血清樣本：390µl稀釋緩沖液）， 在#1孔和#2孔內(nèi)加入100µl的陰性和陽性質(zhì)控，100µl的試驗(yàn)樣品至剩下的孔內(nèi)。

3. 室溫下孵育10min，然后洗滌，最一次洗滌后，吸水紙上拍干

4. 每孔加入100µl酶聯(lián)物

5. 室溫孵育10min，然后洗滌，最一次洗滌后，吸水紙上拍干

6. 每孔加入100µl TMB底物液

7. 室溫下孵育5min

8. 每孔加入100µl終止液，輕輕晃動微孔板混勻15秒

9. 加入終止液1h內(nèi)讀數(shù)

洗滌過程包括微孔內(nèi)加滿洗滌液，然后棄去反應(yīng)液，洗滌三次，避免產(chǎn)生氣泡，氣泡會對最終結(jié)果有影響