BD6025 酪an酸解氨酶試劑盒 抗氧

酪an酸解氨酶（Tyrosine ammonilyase，TAL）試劑盒說明書

微量法 100T/48S

酪an酸解氨酶試劑盒 抗氧

正式測定前務必取 2-3 個預期差異較大的樣本做預測定測定意義

TAL 廣泛存在于植物和微生物中，是苯丙an酸代謝途徑的關鍵酶之一。TAL 能夠躍過肉桂酸-4-羥基化酶（C4H）直接將酪an酸轉化為香dou酸，香dou酸可進一步生成白藜蘆醇、柚皮素等具有抗氧化、抗衰老作用的苯bing素類天然產(chǎn)物。

測定原理：

TAL 能夠分解酪an酸產(chǎn)生香豆酸，使反應溶液 333nm 下的吸光度隨反應時間而上升，根據(jù)吸光度的變化率可計算出 TAL 活性。

組成：

自備儀器和用品：

酶標儀、臺式離心機、可調式移液器、96 孔板（UV 板）、研缽、冰和蒸餾水

粗酶液提?。?/span>

1、細菌、細胞或組織樣品的制備：

細菌或培養(yǎng)細胞：先收集細菌或細胞到離心管內，離心后棄上清；按照細菌或細胞數(shù)量（104 個）：提取液體積（ml）為 500~1000：1 的比例（建議 500 萬細菌或細胞加入 1ml 提取液），超聲波破碎細菌或細胞（冰浴，功率 20％或 200W，超聲 3s，間隔 10s，重復 30 次）；8000g 4℃離心 10min，取上清，置冰上待測。

組織：按照組織質量（g）：提取液體積(ml)為 1：5~10 的比例（建議稱取約 0.1g 組織，加入 1ml 提取液），進行冰浴勻漿。8000g 4℃離心 10min，取上清，置冰上待測。

2、血清（漿）果汁等液體樣品：直接檢測。

測定操作表：

1、酶標儀預熱 30min 以上，調節(jié)波長至 333nm。

2、準備 96 孔 UV 板一塊（非普通酶標板，普通酶標板只能透過可見光，不能透過紫外光，檢測波長小于 340nm 務必使用 UV 板）。

3、試劑二的配置：臨用前在試劑二瓶中加入 10ml 試劑一充分溶解待用（用不完的試劑 4℃保存一周，注意現(xiàn)配現(xiàn)用），在 37℃（哺乳動物）或 25℃（其它物種）水浴 10min 以上。

4、在 EP 管中依次加入如下試劑

混勻，10000g 4℃離心 5min，取 200μl 上清至 96 孔 UV 板，333nm 下測定吸光值 A 測定與 A 對照，

ΔA=A 測定-A 對照

TAL 活性計算：

1、血清（漿）或果汁 TAL 活性

單位的定義：每分鐘每 ml 血清（漿）或果汁在每 ml 反應體系中使 333nm 處吸光值變化

0.005 為一個酶活力單位。

TAL（U/ml）=ΔA×V 反總÷( V 樣÷V 樣總)÷0.005÷T =35×ΔA

2、組織、細菌或細胞 TAL 活性

按樣本蛋白濃度計算：

單位定義：每分鐘每 mg 組織蛋白在每 ml 反應體系中使 333nm 處吸光值變化 0.005 為一個酶活力單位。

TAL（U/mg prot）=ΔA×V 反總÷（V 樣×Cpr）÷0.005÷T =35×ΔA÷Cpr

此法需要自行測定樣本蛋白質濃度。

按樣本鮮重計算：

單位定義：每分鐘每 g 組織在每 ml 反應體系中使 333nm 處吸光值變化 0.005 為一個酶活力單位。

TAL（U/g 鮮重）=ΔA×V 反總÷(W× V 樣÷V 樣總)÷0.005÷T =35×ΔA÷W

按細菌或細胞密度計算：

單位定義：每分鐘每 1 萬個細菌或細胞在每 ml 反應體系中使 333nm 處吸光值變化 0.005 為一個酶活力單位。

TAL（U/104 cell）=ΔA×V 反總÷(500×V 樣÷V 樣總)÷0.005÷T =0.07×ΔA

V 反總：反應體系總體積，0.42ml；V 樣：加入樣本體積，0.04ml；V 樣總：加入提取液體積，1 ml； T：反應時間，60 min；Cpr：樣本蛋白質濃度，mg/ml；W：樣本質量，g；500：細胞或細菌總數(shù)，500萬。

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