BC6016 超氧陰離子試劑盒 氧化系列-常備現(xiàn)貨
- 公司名稱 北京諾博萊德科技有限公司
- 品牌 NobleRyder/諾博萊德
- 型號 BC6016
- 產地
- 廠商性質 經銷商
- 更新時間 2025/4/3 17:00:34
- 訪問次數(shù) 49
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| 供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 規(guī)格 | 100T/96S |
|---|---|---|---|
| 貨號 | BC6016 | 應用領域 | 環(huán)保,化工,生物產業(yè),農林牧漁,制藥/生物制藥 |
| 主要用途 | 超氧陰離子(Oxygen free radical, OFR)試劑盒 |
超氧陰離子(Oxygen free radical, OFR)試劑盒說明書
微量法 100T/96S
正式測定前務必取 2-3 個預期差異較大的樣本做預測定測定意義：
生物體內超氧陰離子等活性氧具有免疫和信號傳導的作用，但積累過多時會對細胞膜及生物大分子產生破壞作用，導致機體細胞和組織代謝異常，從而引起多種疾病。
測定原理：
超氧陰離子與鹽酸羥胺反應生成 NO2-，NO2-在對氨基苯磺酸和α－萘胺的作用下，生成紅色的偶氮化 合物，在 530nm 處有特征吸收峰，根據(jù)ΔA 值可以計算樣品中 O2－含量，反應式為 NH2OH + 2O2- ＋H ＋ → NO2-＋ H2O2 ＋ H2O。
超氧陰離子試劑盒 氧化系列-常備現(xiàn)貨
試劑組成和配制：
產品名稱 | BC6016-100T/96S | Storage |
提取液：液體 | 110ml | 4℃ |
試劑一：液體 | 20ml | 4℃ |
試劑二：液體 | 15ml | 4℃避光 |
試劑三：液體 | 15ml | 4℃避光 |
試劑四：氯仿 | 自備 | -- |
說明書 | 一份 | |
自備儀器和用品：
天平、水浴鍋、離心機、可見分光光度計/酶標儀、微量石英比色皿/96 孔板、氯仿和蒸餾水。
超氧陰離子提?。?/span>
1、植物、動物組織：按照組織質量（g）：提取液體積(ml)為 1：5~10 的比例（建議稱取約 0.1g 組織，加入 1ml 提取液）進行冰浴勻漿，然后，10000g，4℃，離心 20min，取上清置于冰上待測。
2、細菌、真菌：按照細胞數(shù)量（104 個）：提取液體積（ml）為 500~1000：1 的比例（建議 500 萬細胞加入 1ml 提取液），冰浴超聲波破碎細胞（功率 300w，超聲 3 秒，間隔 7 秒，總時間 3min）；然后 10000g， 4℃，離心 20min，取上清置于冰上待測。
3、血清或培養(yǎng)液：直接測定。
測定步驟：
1、分光光度計預熱 30min 以上，調節(jié)波長至 530nm，蒸餾水調零。
2、加樣表
空白管 | 測定管 | |
樣本（μl） | 200 | |
提取液（μl） | 200 | |
試劑一(μl) | 160 | 160 |
混勻，37℃水浴 20min
試劑二（μl） | 120 | 120 |
試劑三（μl） | 120 | 120 |
混勻，37℃水浴 20min
試劑四（μl） | 200 | 200 |
混勻，8000g，25℃，離心 5min，小心吸取上層水相 200μl 于微量石英比色皿/96 孔板中，測定A530。 ΔA=A 測定-A 空白，空白管只要做一管。
超氧陰離子含量計算公式：
a. 用微量石英比色皿測定的計算公式如下
標準曲線：y = 0.0242x - 0.0027，R2=0.9980
1. 組織：
（1） 按照樣本質量計算
超氧陰離子含量（nmol/g 鮮重）= (ΔA+0.0027)÷0.0242×V 反總÷(V 樣÷V 樣總×W)×2
=148.76×(ΔA+0.0027)÷W
超氧陰離子產生速率（nmol/ g·min）=148.76×(ΔA+0.0027)÷W÷T
=7.44× (ΔA+0.0027)÷W
（2） 按照蛋白質濃度計算
超氧陰離子含量（nmol/mg prot）= (ΔA+0.0027)÷0.0242×V 反總÷(V 樣×Cpr)×2
=148.76×(ΔA+0.0027)÷Cpr
超氧陰離子產生速率（nmol/ mg prot·min）= 148.76×(ΔA+0.0027)÷Cpr÷T
=7.44× (ΔA+0.0027)÷Cpr
2. 細菌，真菌：
超氧陰離子含量（nmol/104 cell）= (ΔA+0.0027)÷0.0242× V 反總÷(V 樣÷V 樣總×細胞數(shù)量)×2
= 148.76×(ΔA+0.0027)÷細胞數(shù)量
超氧陰離子產生速率（nmol/104 cell·min）= 148.76×(ΔA+0.0027)÷細胞數(shù)量÷T
=7.44× (ΔA+0.0027)÷細胞數(shù)量
3. 血清或培養(yǎng)液
超氧陰離子 含量（nmol/ml）= (ΔA+0.0027)÷0.0242×V 反總÷V 樣×2
=148.76× (ΔA+0.0027)
超氧陰離子產生速率（nmol/ml·min）= 148.76× (ΔA+0.0027) ÷T
= 7.44× (ΔA+0.0027)
V 樣總：加入提取液體積，1 ml； V 反總：反應總體積，0.36ml；V 樣：反應中樣品體積，0.2ml； Cpr：樣本蛋白質濃度，mg/ml；W：樣品質量，g；T：反應時間，20min；2: 2 分子O2－參與反應生成 1分子NO2－。
b. 用 96 孔板測定的計算公式如下
標準曲線：y = 0.0121x - 0.0027，R2 = 0.9980
1. 組織：
（1） 按照樣本質量計算
超氧陰離子含量（nmol/g 鮮重）= (ΔA+0.0027)÷0.0121×V 反總÷(V 樣÷V 樣總×W)×2
=297.52× (ΔA+0.0027)÷W
超氧陰離子產生速率（nmol/ g·min）=297.52× (ΔA+0.0027)÷W÷T
=14.88× (ΔA+0.0027)÷W
（2） 按照蛋白質濃度計算
超氧陰離子含量（nmol/mg prot）= (ΔA+0.0027)÷0.0121×V 反總÷(V 樣×Cpr)×2
=297.52× (ΔA+0.0027)÷Cpr
超氧陰離子產生速率（nmol/ mg prot·min）= 297.52× (ΔA+0.0027)÷Cpr÷T
=14.88× (ΔA+0.0027)÷Cpr
2. 細菌，真菌：
超氧陰離子含量（nmol/104 cell）=(ΔA+0.0027)÷0.0121× V 反總÷(V 樣÷V 樣總×細胞數(shù)量)×2
=297.52× (ΔA+0.0027)÷細胞數(shù)量
超氧陰離子產生速率（nmol/104 cell·min）=297.52× (ΔA+0.0027)÷細胞數(shù)量÷T
=14.88× (ΔA+0.0027)÷細胞數(shù)量
3. 血清或培養(yǎng)液
超氧陰離子 含量（nmol/ml）=(ΔA+0.0027)÷0.0121 ×V 反總÷V 樣×2
=297.52×(ΔA+0.0027)
超氧陰離子產生速率（nmol/ml·min）= 297.52×(ΔA+0.0027) ÷T
=14.88×(ΔA+0.0027)
V 樣總：加入提取液體積，1 ml； V 反總：反應總體積，0.36ml；V 樣：反應中樣品體積，0.2ml； Cpr：樣本蛋白質濃度，mg/ml；W：樣品質量，g；T：反應時間，20min；2：2 分子O2－參與反應生成 1分子NO2－。
注意事項：
1、OD 值大于 1，樣品適當稀釋再測定，注意計算公式里乘以稀釋倍數(shù)。
2、樣品制備好后，立刻進行測定，請勿將樣品進行長時間的低溫保存，以免影響測定結果。
3、試劑四有一定的毒性，請操作時做好防護措施。
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