三種凝膠法常用方法：試管法、玻片法及毛細(xì)吸管法的介紹

凝膠法常用的方法有三種，即試管法、玻片法及毛細(xì)吸管法。

1. 試管法

將等量的被檢樣品與鱟試劑加入試管，混勻，放入水浴中讓其充分反應(yīng)，然后取出觀察凝膠形成的情況。實(shí)驗(yàn)時共需作四種試管，即試驗(yàn)管、陽性對照管、陰性對照管及陰性抑制對照管。

試驗(yàn)管：取標(biāo)本0.1ml+鱟試劑0.1ml。一般的標(biāo)本如水、注射液等，實(shí)驗(yàn)前不須加以處理，但血液及腹腔滲出液等實(shí)驗(yàn)前必須加以處理，因?yàn)樵谶@些標(biāo)本中可能會有LT（Limulus test，鱟試劑法）反應(yīng)的抑制物質(zhì)。應(yīng)用的鱟試劑應(yīng)事前以標(biāo)準(zhǔn)內(nèi)毒素進(jìn)行標(biāo)定，并認(rèn)為是可用的。

陽性對照管:標(biāo)準(zhǔn)內(nèi)毒素0.1ml+鱟試劑0.1ml。標(biāo)準(zhǔn)內(nèi)毒素用前應(yīng)以WHO標(biāo)準(zhǔn)品標(biāo)定。所用的內(nèi)毒素濃度按鱟試劑的敏感性而定，一般為1～5 ng/ ml。

陰性對照管:無熱原水0.1ml+鱟試劑0.1ml。

抑制對照管:標(biāo)本0.1ml＋標(biāo)準(zhǔn)內(nèi)毒素0.1ml+鱟試劑0.2ml。

上述四管均放入37℃孵育1～2小時觀察結(jié)果。如形成凝膠堅固，試管倒轉(zhuǎn)180度不變形，則記為（++）；如混濁度和粘滯性明顯增加，呈膠體狀，但傾斜試管時變形，則記為（+）；如液體流動自如，透明無變化或稍混濁，有少量顆粒細(xì)絮片狀物，則記為（-）。

如被檢樣品中有抑制物存在，則可將檢品作適當(dāng)?shù)南♂尰蚪?jīng)各種處理以除去抑制物，再次測試。如這些方法無效，亦可采用其它內(nèi)毒素檢測法，如RT（Rabbit pyrogen test，家兔熱原實(shí)驗(yàn)）法。

2. 玻片法

鑒于試管法耗費(fèi)鱟試劑量多，結(jié)果判定不易標(biāo)準(zhǔn)化，需用時間較長等缺點(diǎn)，Frauch于1974年首先創(chuàng)用了玻片法。將10μl鱟試劑與已處理過的被檢樣品10μl滴于無菌無熱原的玻片上，充分混勻，水平放置37℃30分鐘，取出觀察結(jié)果。如標(biāo)本中含有內(nèi)毒素，則混合物形成凝膠，倒轉(zhuǎn)玻片時混合物不流動，觸之較結(jié)實(shí)。反之則說明樣本中不含內(nèi)毒素或內(nèi)毒素含量過低。

Goto等于1977年對此法進(jìn)行了兩點(diǎn)改進(jìn)。①增加鱟試劑及樣品的量，所用量各為20μl。由于Frauch法僅用10μl的鱟試劑及10μl的被檢標(biāo)本，量太少，且形成凝膠后其體積更小，不易判斷結(jié)果。故各增加鱟試劑及被檢標(biāo)本量1倍，這樣結(jié)果判定更正確、容易些。②使用不含硅的玻片。由于硅玻璃組成的玻片，滴加在其上的液體可向四周擴(kuò)散，而顯得不規(guī)則。不含硅的玻片可使滴加在其上的液體保持穩(wěn)定，不向四周擴(kuò)散，這樣，為結(jié)果的判斷提取了方便。

3. 毛細(xì)吸管法

此法由瑞典學(xué)者Gardi于1980年首先創(chuàng)用。將10μl被檢標(biāo)與10μl鱟試劑滴于無菌無熱原的載玻片上，充分混勻，然后以毛細(xì)吸管吸入其內(nèi)（一般為2/3的高度），水平37℃孵育45-60分鐘，取出毛細(xì)吸管，再浸入溴酚染料中2～3秒鐘，取出即可判斷結(jié)果。如染料能進(jìn)入毛細(xì)吸管，則說明樣品中無內(nèi)毒素或所含的內(nèi)毒素量低于鱟試劑檢測的敏感度記為（-）；如有堅固凝膠形成以致染色不能浸入，即說明樣本含有內(nèi)毒素，記為（+）。此法敏感性高、操作簡便、所需試劑量少、孵育時間短，結(jié)果判斷較客觀。

我們實(shí)驗(yàn)室于1982-1983年間應(yīng)用毛細(xì)吸管微量測定法對臨床的多種標(biāo)本進(jìn)行了內(nèi)毒素檢測，結(jié)果較為滿意，認(rèn)為此法值得在臨床上廣泛推廣。

目前，日本已有專門的內(nèi)毒素微量檢測管出售，這種毛細(xì)吸管內(nèi)已裝有微量的凍干鱟試劑，只需將此管插入液相標(biāo)本，取出孵育一定的時間后即能判斷結(jié)果。