您好, 歡迎來(lái)到化工儀器網(wǎng)! 登錄| 免費(fèi)注冊(cè)| 產(chǎn)品展廳| 收藏商鋪|
大(?。┦笸庵苎行粤<?xì)胞分離液 KIT 說(shuō)明書(shū) 大(?。┦笸庵苎行粤<?xì)胞分離液 KIT 說(shuō)明書(shū)
【產(chǎn)品規(guī)格】
200ml/Kit
【產(chǎn)品組成】
為方便廣大用戶(hù)使用,試劑內(nèi)容如下:
| 名稱(chēng) | 產(chǎn)品編號(hào) | 規(guī)格 |
A | 中性粒細(xì)胞分離液試劑 A |
| 200ml |
B | 樣本稀釋液 | 2010C1119 | 200ml |
C | 清洗液(贈(zèng)品) | 2010X1118 | 200ml |
D | 紅細(xì)胞裂解液(贈(zèng)品) | NH4CL2009 | 100ml |
E | 紅細(xì)胞沉降液(6%羥乙基淀粉) | HES-TBD550-80 | 80ml |
F | 說(shuō)明書(shū) |
| 1 份 |
【實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備】
適用儀器:zui大離心力可達(dá) 1200g 的水平轉(zhuǎn)子離心機(jī)
【檢驗(yàn)方法】
全過(guò)程樣本、試劑及實(shí)驗(yàn)環(huán)境均需在 20±2℃的條件下進(jìn)行。
1取一支 15ml 離心管,先加入中性粒細(xì)胞分離液試劑 A:3ml,后加入 80%濃度試劑 A溶液(中性粒細(xì)胞分離液試劑 A:樣本稀釋 液=4:1 的混合液):1.5ml,形成梯度界面。
2制備血液樣本:抗凝血液與紅細(xì)胞沉降液按 1:1 比例混勻后,小心加于分離液梯度界面之上,800g 離心 20min。
3離心后,血漿層下出現(xiàn)兩層白色環(huán)狀細(xì)胞層,取下層白色環(huán)狀中性粒細(xì)胞層(會(huì)有少量紅細(xì)胞混雜),加 3-5 倍體積清洗液混勻,400g 離心 10min。
4離心后棄上清,后可通過(guò)兩種方法去除紅細(xì)胞。
方法一:細(xì)胞沉淀用紅細(xì)胞裂解液去除紅細(xì)胞(具體方法參見(jiàn)“紅細(xì)胞裂解液說(shuō)明書(shū)”)。
方法二:
1細(xì)胞沉淀用 1ml 紅細(xì)胞沉降液重懸,加于 3ml 中性粒細(xì)胞分離液試劑 A 之液面上,400g 離心 20min。
2取白色環(huán)狀細(xì)胞層,加 3-5 倍體積清洗液混勻,250g 離心 10min,重復(fù)洗滌 2-3 次,獲得目的細(xì)胞(如仍有少量紅細(xì)胞混雜,使用紅細(xì)胞裂解液去除紅細(xì)胞)。
【注意事項(xiàng)】
1全過(guò)程樣本、試劑及實(shí)驗(yàn)環(huán)境均需在 20±2℃的條件下進(jìn)行。為獲得*的實(shí)驗(yàn)結(jié)果,在取血 2h 內(nèi)進(jìn)行實(shí)驗(yàn),血液存放時(shí)間越長(zhǎng),細(xì)胞分離效果越差。血液放置超過(guò) 6h 后分離效果更差甚至不能達(dá)到分離目的。
2本實(shí)驗(yàn)不使用高聚合材質(zhì)(如聚苯乙烯)的塑料制品,應(yīng)使用無(wú)靜電、低靜電離心管及未經(jīng)堿處理過(guò)后的玻璃制品,因?yàn)殪o電作用將導(dǎo)致細(xì)胞貼壁、堿處理的玻璃表面會(huì)變成毛面,影響細(xì)胞分離效果。
3分離液用量大于血液樣本時(shí),分離效果更佳。
4請(qǐng)勿使用具有紅細(xì)胞保護(hù)成分的抗凝劑,否則影響分離效果(離心后,紅細(xì)胞不能*沉至離心管底部)。
【儲(chǔ)存條件及有效期】
18-25℃保存,有效期 2 年。本品易感染細(xì)菌,需無(wú)菌條件操作。無(wú)菌條件下操作,啟封后置常溫保存。如 4℃保存,本分離液易出現(xiàn)白色結(jié)晶,影響分離效果。
【參考值(參考范圍)】
本實(shí)驗(yàn)中性粒細(xì)胞提取率大于 80%。
【相關(guān)實(shí)驗(yàn)技術(shù)方案】
1所獲得中性粒細(xì)胞的培養(yǎng)技術(shù)。
2所獲得中性粒細(xì)胞的核酸提取技術(shù)。
3所獲得中性粒細(xì)胞的鑒定方法
A.流式細(xì)胞技術(shù)
B.免疫組化技術(shù)
C.原位雜交技術(shù)
D.PCR 技術(shù)
【可能存在的問(wèn)題及解決方法】
1.由于血液粘度、細(xì)胞密度等差異可能造成的問(wèn)題及解決方案如下表所示:
出現(xiàn)情況 | 出現(xiàn)原因 |
| 建議解決方案 |
|
離心后目的細(xì)胞存在于血漿層或稀釋液層 | 轉(zhuǎn)速過(guò)小或離心時(shí)間過(guò)短 | 適當(dāng)增減轉(zhuǎn)速 |
| |
離心后目的細(xì)胞存在于分離液中 | 轉(zhuǎn)速過(guò)大或離心時(shí)間過(guò)長(zhǎng) |
| ||
|
|
| 離心后白環(huán)層彌散 | 細(xì)胞密度過(guò)大 | 調(diào)整細(xì)胞密度 |
|
| 離心后白環(huán)層太淺或看不見(jiàn) | 細(xì)胞密度過(guò)小 |
| |
|
|
|
?2本分離液分離細(xì)胞的原理為密度梯度離心,其密度與溫度、大氣壓等密切相關(guān)。不同地區(qū)客戶(hù)可根據(jù)當(dāng)?shù)厍闆r對(duì)離心條件進(jìn)行適當(dāng)調(diào)整。建議對(duì)離心條件進(jìn)行調(diào)整時(shí),恒定離心時(shí)間,對(duì)離心轉(zhuǎn)速進(jìn)行調(diào)整。
3本分離液依照標(biāo)準(zhǔn),全部使用藥用級(jí)原料,性能指標(biāo)與國(guó)產(chǎn)同類(lèi)產(chǎn)品略有不同,可能出現(xiàn)紅細(xì)胞沉降不*的情況,可以適當(dāng)加大離心轉(zhuǎn)速。
注:在對(duì)離心條件進(jìn)行調(diào)整時(shí),離心轉(zhuǎn)速的加減以 50-100g 為基數(shù),直至達(dá)到*分離效果,離心力zui小不得小于 400g,zui大不得大于 1200g。離心時(shí)間以 20-30min 為準(zhǔn)。
請(qǐng)輸入賬號(hào)
請(qǐng)輸入密碼
請(qǐng)輸驗(yàn)證碼
以上信息由企業(yè)自行提供,信息內(nèi)容的真實(shí)性、準(zhǔn)確性和合法性由相關(guān)企業(yè)負(fù)責(zé),化工儀器網(wǎng)對(duì)此不承擔(dān)任何保證責(zé)任。
溫馨提示:為規(guī)避購(gòu)買(mǎi)風(fēng)險(xiǎn),建議您在購(gòu)買(mǎi)產(chǎn)品前務(wù)必確認(rèn)供應(yīng)商資質(zhì)及產(chǎn)品質(zhì)量。