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中級(jí)會(huì)員 | 第16年

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大(?。┦笸庵苎行粤<?xì)胞分離液 KIT 說(shuō)明書(shū)

時(shí)間:2016/12/28閱讀:2780
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大(?。┦笸庵苎行粤<?xì)胞分離液 KIT 說(shuō)明書(shū)   大(?。┦笸庵苎行粤<?xì)胞分離液 KIT 說(shuō)明書(shū)

【產(chǎn)品規(guī)格】

200ml/Kit

【產(chǎn)品組成】

為方便廣大用戶(hù)使用,試劑內(nèi)容如下:

 

名稱(chēng)

產(chǎn)品編號(hào)

規(guī)格

A

中性粒細(xì)胞分離液試劑 A

 

200ml

B

樣本稀釋液

2010C1119

200ml

C

清洗液(贈(zèng)品)

2010X1118

200ml

D

紅細(xì)胞裂解液(贈(zèng)品)

NH4CL2009

100ml

E

紅細(xì)胞沉降液(6%羥乙基淀粉)

HES-TBD550-80

80ml

F

說(shuō)明書(shū)

 

 

【實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備】

適用儀器:zui大離心力可達(dá) 1200g 的水平轉(zhuǎn)子離心機(jī)

【檢驗(yàn)方法】

全過(guò)程樣本、試劑及實(shí)驗(yàn)環(huán)境均需在 20±2℃的條件下進(jìn)行。

1取一支 15ml 離心管,先加入中性粒細(xì)胞分離液試劑 A:3ml,后加入 80%濃度試劑 A溶液(中性粒細(xì)胞分離液試劑 A:樣本稀釋   液=4:1 的混合液):1.5ml,形成梯度界面。

2制備血液樣本:抗凝血液與紅細(xì)胞沉降液按 1:1 比例混勻后,小心加于分離液梯度界面之上,800g 離心 20min。

3離心后,血漿層下出現(xiàn)兩層白色環(huán)狀細(xì)胞層,取下層白色環(huán)狀中性粒細(xì)胞層(會(huì)有少量紅細(xì)胞混雜),加 3-5 倍體積清洗液混勻,400g 離心 10min。

4離心后棄上清,后可通過(guò)兩種方法去除紅細(xì)胞。

方法一:細(xì)胞沉淀用紅細(xì)胞裂解液去除紅細(xì)胞(具體方法參見(jiàn)“紅細(xì)胞裂解液說(shuō)明書(shū)”)。

方法二:

1細(xì)胞沉淀用 1ml 紅細(xì)胞沉降液重懸,加于 3ml 中性粒細(xì)胞分離液試劑 A 之液面上,400g 離心 20min。

2取白色環(huán)狀細(xì)胞層,加 3-5 倍體積清洗液混勻,250g 離心 10min,重復(fù)洗滌 2-3 次,獲得目的細(xì)胞(如仍有少量紅細(xì)胞混雜,使用紅細(xì)胞裂解液去除紅細(xì)胞)。

【注意事項(xiàng)】

1全過(guò)程樣本、試劑及實(shí)驗(yàn)環(huán)境均需在 20±2℃的條件下進(jìn)行。為獲得*的實(shí)驗(yàn)結(jié)果,在取血 2h 內(nèi)進(jìn)行實(shí)驗(yàn),血液存放時(shí)間越長(zhǎng),細(xì)胞分離效果越差。血液放置超過(guò) 6h 后分離效果更差甚至不能達(dá)到分離目的。

2本實(shí)驗(yàn)不使用高聚合材質(zhì)(如聚苯乙烯)的塑料制品,應(yīng)使用無(wú)靜電、低靜電離心管及未經(jīng)堿處理過(guò)后的玻璃制品,因?yàn)殪o電作用將導(dǎo)致細(xì)胞貼壁、堿處理的玻璃表面會(huì)變成毛面,影響細(xì)胞分離效果。

3分離液用量大于血液樣本時(shí),分離效果更佳。

4請(qǐng)勿使用具有紅細(xì)胞保護(hù)成分的抗凝劑,否則影響分離效果(離心后,紅細(xì)胞不能*沉至離心管底部)。

【儲(chǔ)存條件及有效期】

18-25℃保存,有效期 2 年。本品易感染細(xì)菌,需無(wú)菌條件操作。無(wú)菌條件下操作,啟封后置常溫保存。如 4℃保存,本分離液易出現(xiàn)白色結(jié)晶,影響分離效果。

【參考值(參考范圍)】

本實(shí)驗(yàn)中性粒細(xì)胞提取率大于 80%。

【相關(guān)實(shí)驗(yàn)技術(shù)方案】

1所獲得中性粒細(xì)胞的培養(yǎng)技術(shù)。

2所獲得中性粒細(xì)胞的核酸提取技術(shù)。

3所獲得中性粒細(xì)胞的鑒定方法

A.流式細(xì)胞技術(shù)

B.免疫組化技術(shù)

C.原位雜交技術(shù)

D.PCR 技術(shù)

【可能存在的問(wèn)題及解決方法】

1.由于血液粘度、細(xì)胞密度等差異可能造成的問(wèn)題及解決方案如下表所示:

出現(xiàn)情況

出現(xiàn)原因

 

建議解決方案

 

離心后目的細(xì)胞存在于血漿層或稀釋液層

轉(zhuǎn)速過(guò)小或離心時(shí)間過(guò)短

適當(dāng)增減轉(zhuǎn)速

 

離心后目的細(xì)胞存在于分離液中

轉(zhuǎn)速過(guò)大或離心時(shí)間過(guò)長(zhǎng)

 

 

 

 

離心后白環(huán)層彌散

細(xì)胞密度過(guò)大

調(diào)整細(xì)胞密度

 

 

離心后白環(huán)層太淺或看不見(jiàn)

細(xì)胞密度過(guò)小

 

 

 

 

?2本分離液分離細(xì)胞的原理為密度梯度離心,其密度與溫度、大氣壓等密切相關(guān)。不同地區(qū)客戶(hù)可根據(jù)當(dāng)?shù)厍闆r對(duì)離心條件進(jìn)行適當(dāng)調(diào)整。建議對(duì)離心條件進(jìn)行調(diào)整時(shí),恒定離心時(shí)間,對(duì)離心轉(zhuǎn)速進(jìn)行調(diào)整。

3本分離液依照標(biāo)準(zhǔn),全部使用藥用級(jí)原料,性能指標(biāo)與國(guó)產(chǎn)同類(lèi)產(chǎn)品略有不同,可能出現(xiàn)紅細(xì)胞沉降不*的情況,可以適當(dāng)加大離心轉(zhuǎn)速。

注:在對(duì)離心條件進(jìn)行調(diào)整時(shí),離心轉(zhuǎn)速的加減以 50-100g 為基數(shù),直至達(dá)到*分離效果,離心力zui小不得小于 400g,zui大不得大于 1200g。離心時(shí)間以 20-30min 為準(zhǔn)。

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