采用ELISA來定量測定結(jié)合的噬菌體

采用ELISA來定量測定結(jié)合的噬菌體

 [器材和試劑]

●  洗滌緩沖液

●  結(jié)合緩沖液

●  辣根過氧化物酶（HRP）連接的抗M13單克隆抗體（mAb）  （Amersham Biosciences）   

●  HRP底物㈠OPD（鄰苯二胺，o-phe-nylenediamine）  （Sigma）或ATBS  【2，2-連氮基-雙-（3-乙基苯并噻吡咯啉-6-磺 酸），2，2’-azinobis（3-ethylbenzothiazo-line-6-sulfonic acid）】  （Kinkegaard和Perry）

●  預(yù)先準備的噬菌體包被的微孔板

[方法]

1，每塊板用洗滌緩沖液洗滌3次。

2．用結(jié)合緩沖液將HRP聯(lián)結(jié)的抗M13單克隆抗體做1：5000稀釋，每孔加入100ul，室  溫下孵育30分鐘。

3．每塊板用洗滌緩沖液洗滌3次。

4．每孔加入lOOglOPD顯色，不超過15分鐘后用50ul 2．5mol/L的HzS04終止反應(yīng)。5．檢測每塊板在492nm處的吸光度。

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