EIASA法檢測白細胞介素-8

EIASA法檢測白細胞介素-8

    IL-8來源于單個核細胞，其主要的生物學活性有：引導嗜中性粒細胞趨化、脫粒、釋放溶菌酶，加強炎癥防護；促進嗜堿性粒細胞趨化、脫粒、釋放組胺，加強過敏反應；使T細胞趨化、游走，加強免疫。HBV感染能誘導肝細胞合成大量TNF-a，而TNF-a又可誘導肝細胞合成IL-8，IL-8促進肝內炎癥反應，介導肝細胞損傷，誘導各類細胞分化增殖，從而使慢性肝臟炎癥持續(xù)存在，并導致纖維化形成。HCV感染能使機體細胞毒T淋巴細胞產生TNF-a、IL-8等多種促炎細胞因子，從而誘導肝損傷。

    [檢測方法]  EIASA法

    [方法學原理]  在微孔反應板上包被抗人IL-8單克隆抗體，待測標本和標準晶中的IL-8會與抗人IL-8單克隆抗體結合，游離的成分被洗去，同時加入生物素化的抗人IL-8抗體和辣根過氧化物酶標記的親和素。生物素與親和素特異結合，抗人IL-8抗體與結合在單克隆抗體上的人IL-8結合而形成免疫復合物，游離的成分被洗去。加入顯色劑，若反應孔中有IL-8，HRP會使五色的顯色劑呈現(xiàn)藍色，加終止液變黃色。在波長450nm處測吸光度，IL-8濃度與吸光度成正比，可通過繪制標準曲線求出標本中的IL-8濃度。

    [標本準備]  靜脈采血2ml，不抗凝

    [試劑]

    1．預包被微孔反應板

    2．濃縮酶結合物

    3，酶結合物稀釋液

    4．標準品和標本稀釋液

    5．濃縮生物素化抗體

    6．IL-8標準晶

    7．濃縮洗滌液

    8．顯色劑A、B

    9．終止液

    [儀器]  酶標儀或全自動酶聯(lián)免疫檢測儀。

    [檢測步驟]

    1．在微孔反應板相應孔中分別加入待測樣本、不同濃度標準品100ul，再加生物素化抗體工作液50ul。

    2．振蕩混勻，置20～25℃環(huán)境中溫育120min。

    3．將孔內液體吸干，用洗滌液充分洗滌5次，干燥。

    4．除空白孔外，加入酶結合物工作液100ul。

    5．振蕩混勻，置20-25℃環(huán)境中溫育30min。

    6．將孔內液體吸干，用洗滌液充分洗滌5次，干燥。

    7．每孔加入顯色劑A、B各50ul，輕輕振蕩混勻，37℃環(huán)境中避光顯色10min。

    8．加入終止液50ul后，輕輕振蕩混勻。用酶標儀（450nm波長）測定各孔吸光度，與標準曲線對照，求出IL-8水平。

    [正常參考值]  各實驗室可根據檢測方法的不同確立正常參考值。

    [注意事項]

    1．試劑盒從冷藏環(huán)境中取出時應在室溫環(huán)境中平衡30min后方可使用，未用完的微孔條用自封袋密封保存。

    2．酶標板洗滌時各孔均需加滿洗滌液，防止孔內有游離酶不能洗凈。應設定30～60s的洗滌浸泡時間。

    3．滴加試劑前應將滴瓶翻轉數(shù)次，使液體混勻。滴加時瓶身應保持垂直，以使滴量準確。

    4．所有樣品和廢棄物都應按傳染源處理。終止液為2mol／L硫酸，使用時應注意安全。

    5．每批樣本應同時做標準曲線。

    [臨床意義]  慢性活動性肝炎患者血清IL-8水平上升，且與病情相一致。急性白血病患者外周血IL-8水平明顯高于正常人；動態(tài)觀察骨髓移植患者血清IL-8水平有助于預測干細胞移植后粒細胞的恢復期；監(jiān)測血清IL-8水平還可預測感染。

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