ELISA法檢測(cè)沙眼衣原體抗體

ELISA法檢測(cè)沙眼衣原體抗體

    沙眼衣原體有3個(gè)生物學(xué)變種，其中2個(gè)與人類疾病有關(guān)，引起沙眼及包涵體結(jié)膜炎。沙眼是世界范圍流行的眼病，是致盲的重要原因。此外，沙眼衣原體、人型支原體、解脲脲原體是引起人類泌尿生殖系統(tǒng)感染的重要病原體，尤以沙眼衣原體更重要。常用檢查方法有ELISA和生物芯片法檢測(cè)沙眼衣原體抗體。

    [檢測(cè)方法]  ELISA法

    [方法學(xué)原理）  在已包被沙眼衣原體抗原的微孔板孑L內(nèi)，加入待測(cè)血清和HRP-抗人Ig，再加入酶底物顯色。根據(jù)顯色強(qiáng)度可判定沙眼衣原體抗體的有無(wú)及水平。

    [試劑]

    1．預(yù)包被微孔板

    2．洗滌液

    3．HRP-抗人IgG

    4．陰性對(duì)照、陽(yáng)性對(duì)照

    5．底物液

    6．終止液

    [儀器]  酶標(biāo)儀或全自動(dòng)酶聯(lián)免疫檢測(cè)儀。

    [檢測(cè)步驟]

    1．從試劑盒中取出已包被沙眼衣原體抗原的微孔板和所有試劑，預(yù)溫至室溫。

    2．將待檢血清、校準(zhǔn)血清、陰性和陽(yáng)性質(zhì)控血清用稀釋液作1：20稀釋。分別加至相應(yīng)的微孔內(nèi)，每孔100u1?？瞻卓准酉♂寗?/span>100ul。

    3．室溫環(huán)境中溫育20min后用洗滌液洗3次，每次洗滌量250ul。

    4．各孔分別加HRP-抗人IgGl00~1，室溫環(huán)境中溫育20min，同上法洗滌3次。

    5．各孔加底物溶液100rtl，室溫環(huán)境中溫育10min顯色，每孔加終止液100gl終止反應(yīng)。

    6．在酶聯(lián)免疫測(cè)定儀上測(cè)定450nm波長(zhǎng)的吸光度。

    [正常參考值]  沙眼衣原體抗體陰性。

    [結(jié)果判斷]

    1．將吸光度用下列公式換算成ISR值：

ISR＝樣品的吸光度÷（校準(zhǔn)物的平均吸光度×校正因子）

（校正因子在校準(zhǔn)血清的標(biāo)簽上）

    2．待測(cè)血清ISR值≤0．9為陰性。

    3．待測(cè)血清ISR值為0．91一1. 09為可疑陽(yáng)性，應(yīng)重新檢測(cè)或隨診。

    4．待測(cè)血清ISR值≥1．10為陽(yáng)性。

    [注意事項(xiàng)]

    1．每次試驗(yàn)均須設(shè)置陽(yáng)性與陰性質(zhì)控血清和校準(zhǔn)血清測(cè)定孔。

    2．用450nm波長(zhǎng)，試劑空白的吸光度必須<0．15；陰性質(zhì)控血清的吸光度必須<0．25；陽(yáng)性質(zhì)控血清的吸光度必須≥0．50；校準(zhǔn)血清的吸光度必須≥0．25。

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