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葡聚糖凝膠色譜柱選擇條件:
梯度洗脫在Sephadex使用中并不象在正相柱層析中那么重要。首先你的樣品須要能溶解在盡量少量的洗脫劑中。極性在的用甲醇水系統(tǒng);極性小者一般用不含水的系統(tǒng)。我們實(shí)驗(yàn)室常用正己烷二氯甲烷甲醇系統(tǒng),用了很多年,效果較好。
(2) 飽和層析柱:
用洗脫劑將凝膠搖勻,直立柱身,讓其自然沉降,此時(shí)要防止氣泡留在其中。至少半小時(shí)打開開關(guān),流出幾個(gè)柱體種的洗脫劑,目的是使其膨脹在正確比例的洗脫劑中。
(3) 樣品處理:用盡量少的洗脫劑溶解樣品,常壓過(guò)濾。
(4) 濕法上柱。這也是要有技巧的步驟。
(5) 洗脫:控制流速,一般1drop/s以下,可參見(jiàn)廠家的一些參數(shù);必要時(shí)更改極性(很多時(shí)一個(gè)極性就可以將樣品洗脫完畢)。
再生以備下次使用。
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