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實(shí)驗(yàn)原理許多微生物在其生命活動(dòng)過(guò)程中能產(chǎn)生某種特殊的代謝產(chǎn)物，具有選擇性地抑制或殺死其他微生物的作用，例如抗生素。不同抗生素的抗菌譜是不同的，某些抗生素只對(duì)少數(shù)細(xì)菌有抗菌作用，例如青霉素一般只對(duì)革蘭氏陽(yáng)性菌有抗菌作用，多粘菌素只對(duì)革蘭氏陰性菌有作用，這類抗生素稱為窄譜抗生素；而另一些抗生素則對(duì)多種細(xì)菌有作用，例如四環(huán)素、土霉素對(duì)許多革蘭氏陽(yáng)性菌和革蘭氏陰性菌都有作用，這類抗生素稱為廣譜抗生素。如果將產(chǎn)生某種抗生素的菌劃直線接種在豆芽汁葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基平板上，經(jīng)培養(yǎng)后，就會(huì)長(zhǎng)出一條菌帶，并產(chǎn)生某種
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實(shí)驗(yàn)試劑1.使用前，將RNaseA全部加入SolutionI中并于4度保存。2.按下表用無(wú)水乙醇稀釋DNAWashBuffer，并于室溫保存。D6948-00B:加入8ml無(wú)水乙醇D6948-01B:加入80ml無(wú)水乙醇D6848-02B:加入80ml無(wú)水乙醇實(shí)驗(yàn)步驟1.取1.5-5ml菌液10，000xg室溫離心1min收集菌體沉淀；2.小心去除上清液，加250ulSolutionI/RNase，渦旋或用移液槍上下吹打重懸菌體。3.加250ulSolutionⅡ，來(lái)回顛倒4-6次輕柔混勻，得到
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實(shí)驗(yàn)試劑采用T7?TagAffinityPurificationKitT7?Tag抗體瓊脂。B/W緩沖液：4.29mMNa2HPO4，1.47mMKH2PO4，2.7mMKCl，0.137mMNaCl，1%吐溫-20，pH7.3洗脫緩沖液:0.1M檸檬酸，pH2.2.中和緩沖液：2MTris，pH10.4。PEG20000。實(shí)驗(yàn)步驟1.100ml含重組表達(dá)質(zhì)粒的菌體誘導(dǎo)后，離心5000g×5min，棄上清，收獲菌體，用10ml預(yù)冷的B/W緩沖液重懸。2.重懸液于冰上超聲處理，直至樣品不再粘稠，4
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實(shí)驗(yàn)原理限制性內(nèi)切酶切割后的DNA片斷經(jīng)過(guò)電泳后，按分子量大小被分開(kāi)，排列在瓊脂糖凝膠中，可以將特定的某條DNA帶所在的凝膠切下來(lái)，加熱或用特殊的試劑熔解凝膠，使DNA溶回到溶液中，再經(jīng)過(guò)乙醇沉淀或過(guò)柱即可獲得目的DNA酶切片段。實(shí)驗(yàn)試劑1.電泳緩沖液2.熒光染料3.電泳級(jí)瓊脂糖粉4.10′加樣緩沖液5.DNA分子量標(biāo)準(zhǔn)(DL2000)6.DNA凝膠回收試劑盒實(shí)驗(yàn)設(shè)備1.旋渦混合器2.微量移液取樣器3.移液器吸頭4.1.5ml微量離心管5.雙面微量離心管架6.臺(tái)式離心機(jī)7.瓊脂糖凝膠電泳系統(tǒng)8.
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實(shí)驗(yàn)原理測(cè)定蛋白質(zhì)的定量方法有很多，目前常用的有凱氏定氮法；比色法主要包括雙縮脲法、Folin-酚試劑法及染料結(jié)合法；紫外分光光度法等雙縮脲(Biuret)法：在堿性溶液中，雙縮脲(H2N—CO—NH—CO—NH2)與二價(jià)銅離子作用形成紫紅色的絡(luò)合物，這一反應(yīng)稱雙縮脲反應(yīng)。凡分子中含二個(gè)或二個(gè)以上酰胺基(—CO—NH2)，或與此相似的基團(tuán)[如—CH2—NH2，—CS—NH2，—C(NH)NH2]的任何化合物，無(wú)論這類基團(tuán)直接相連還是通過(guò)一個(gè)碳或氮原子間接相連，均可發(fā)生上述反應(yīng)。蛋白質(zhì)分子含有眾多
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實(shí)驗(yàn)原理我們知道微生物都具有生長(zhǎng)旺、繁殖快的特點(diǎn)，單細(xì)胞微生物如細(xì)菌、酵母菌的個(gè)體細(xì)胞的增大即細(xì)胞物質(zhì)的增加是有限度的，細(xì)胞長(zhǎng)大到一定程度就開(kāi)始分裂繁殖，菌體數(shù)量增多。細(xì)菌旺盛生長(zhǎng)時(shí)幾十分鐘就可繁殖一代。因此他們的生長(zhǎng)往往是通過(guò)繁殖表現(xiàn)出來(lái)的，本質(zhì)上是以群體細(xì)胞數(shù)目增加為生長(zhǎng)標(biāo)志。絲狀微生物如放線菌、霉菌的生長(zhǎng)主要表現(xiàn)為菌絲的伸長(zhǎng)和分枝，他們相互纏繞，很難分清個(gè)體與個(gè)體之間的界限，所以通常以菌絲的重量增長(zhǎng)(細(xì)胞質(zhì)量的增加)或菌絲生長(zhǎng)速度間接來(lái)衡量生長(zhǎng)狀況。目前測(cè)定微生物數(shù)量的方法有直接法和間接法
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實(shí)驗(yàn)原理凝膠遷移或電泳遷移率實(shí)驗(yàn)（EMSA）是一種研究DNA結(jié)合蛋白和其相關(guān)的DNA結(jié)合序列相互作用的技術(shù)，可用于定性和定量分析。這一技術(shù)zui初用于研究DNA結(jié)合蛋白，目前已用于研究RNA結(jié)合蛋白和特定的RNA序列的相互作用。通常將純化的蛋白和細(xì)胞粗提液和32P同位素標(biāo)記的DNA或RNA探針一同保溫，在非變性的聚丙烯凝膠電泳上，分離復(fù)合物和非結(jié)合的探針。DNA-復(fù)合物或RNA-復(fù)合物比非結(jié)合的探針移動(dòng)得慢。同位素標(biāo)記的探針依研究的結(jié)合蛋白的不同，可是雙鏈或者是單鏈。當(dāng)檢測(cè)如轉(zhuǎn)錄調(diào)控因子一類的D
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實(shí)驗(yàn)步驟1.LB培養(yǎng)基Tryptone10gYeastExtract5gNaCl10g加水至1000mL（pH7.2，固體培養(yǎng)基加1.8%瓊脂粉）。2.LB抗性篩選培養(yǎng)基待滅菌后的LB固體培養(yǎng)基溫度降至50℃左右，加入抗生素儲(chǔ)存液至終濃度50μg/mL，即每毫升培養(yǎng)基加抗生素儲(chǔ)存液1μL，搖勻后，倒平板。液體LB抗性篩選培養(yǎng)基，在*冷卻后加入抗生素，加入的量與固體培養(yǎng)基相同。3.LB/Amp/IPTG/X-gal培養(yǎng)基在含100μg/mLAmp的LB瓊脂平板上加入40μLX-gal貯存液和40μ
