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2015年
09月 -
實驗試劑生理鹽水(或PBS)弗氏*佐劑(Freund’scompleteadjuvant,F(xiàn)CA)弗氏不*佐劑(Freund’sincompleteadjuvant,F(xiàn)IA)二甲苯,酒精棉,脫脂棉,2%NaN3實驗設備剪刀(剪兔毛用)一把、彎頭眼科手術鑷子(游離血管用)一把、直頭眼科手術剪(剪血管用)一把,手術刀架,手術刀片,注射器(1ml、10ml,25ml)附針頭,兔子固定架,滅菌三角燒瓶(200ml)或平皿(直徑18cm)、彎頭止血鉗四把,直頭止血鉗兩把,手術縫合線,塑料放血管,紗布等。實【查看全文】
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2015年
09月 -
實驗原理分子生物研究中,zui常用的探針即為雙鏈DNA探針,它廣泛應用于轉(zhuǎn)基因植物拷貝數(shù)的鑒定、臨床診斷等方面。雙鏈DNA探針的合成方法主要有下列兩種:切口平移法和隨機引物合成法。切口平移法(nicktranslation)當雙鏈DNA分子的一條鏈上產(chǎn)生切口時,E.coliDNA聚合酶Ⅰ就可將核苷酸連接到切口的3'羥基末端。同時該酶具有從5'→3'的核酸外切酶活性,能從切口的5'端除去核苷酸。由于在切去核苷酸的同時又在切口的3'端補上核苷酸,從而使切口沿著DNA鏈移動,用放射性核苷酸代替原先無放【查看全文】
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2015年
09月 -
實驗原理線粒體是細胞內(nèi)一種重要細胞器,是細胞進行呼吸作用的場所。細胞的各項活動所需要的能量,主要是通過線粒體呼吸作用來提供的。活體染色是應用無毒或毒性較小的染色劑真實地顯示活細胞內(nèi)某些結(jié)構而又很少影響細胞生命活動的一種染色方法。詹納斯綠B是線垃體的專一性活體染色劑。線粒體中細胞色素氧化酶使染料保持氧化狀態(tài)呈藍綠色,而在周圍的細胞質(zhì)中染料被還原,成為無色狀態(tài)。實驗試劑1.l/300詹納斯綠B染液2.Ringer氏液(哺乳類用)實驗設備1.顯微鏡2.手術器材一套3.解剖盤4.小平皿5.載片6.蓋片7【查看全文】
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2013年
10月 -
DNA段的克隆需要合適的載體,載體或是質(zhì)粒,或是噬菌體,或是病毒,通常大多經(jīng)過人工改造[地的。作為載體必須具備兩條件:一是該載體在細胞內(nèi)必須能自主復制,即必須具備復制原點;二是該載體必須具備適合的酶切位點,且這些酶切位點不在復制原點區(qū)域內(nèi)。以上兩條,保證了載體的可繁殖性和可利用性。為了便于獲得陽隆克隆,載體上常有篩選標記,如對抗菌素的抗性,某些基因產(chǎn)物的顯色反應等。一、質(zhì)粒常用的有pBR322,pUC系列質(zhì)粒等。(一)pBR322質(zhì)粒是4362bp的環(huán)狀雙鏈DNA載體,有2個抗藥性基因(四環(huán)素和【查看全文】
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2013年
10月 -
早期的基因組DNA甲基化分析技術,如SssI甲基轉(zhuǎn)移酶分析法、氯乙醛反應法、免疫學抗體技術等,已經(jīng)不能滿足現(xiàn)代表觀遺傳學研究的需求。今年來常用的基因組甲基化的方法有以下兩種。1.甲基化敏感擴增多態(tài)性實驗甲基化敏感擴增多態(tài)性實驗技術被用于檢測雙向型真菌的DNA甲基化,它是在擴增片段長度多態(tài)性技術的基礎上建立起來、基本程序是:提取高質(zhì)量的基因組DNA,分別用EcoRⅠ/HpaⅡ,EcoRⅠ/MspⅠ兩種酶組合對基因組DNA進行雙酶切,并連上相應的限制性內(nèi)切酶的接頭,然后以接頭序列設計的預擴增引物,進【查看全文】
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2013年
10月 -
基因突變是遺傳物質(zhì)分子結(jié)構的改變,包括在DNA分子編碼區(qū)的密碼子和密碼閱讀框的改變。基因突變可以發(fā)生在體細胞,也可以發(fā)生在生殖細胞中,這兩種突變有*不同的后果。發(fā)生于生殖細胞中的基因突變可以遺傳給后代。發(fā)生于機體其他組織細胞中基因突變的體細胞突變,可以引起發(fā)生突變個體的形態(tài)或生理上的變異,只能通過無性生殖的形式傳遞給后代,而不能通過有性生殖遺傳下去(在胚胎細胞發(fā)育時期出現(xiàn)的情況例外)。1.突變的稀有性基因突變的稀有性是指在正常情況下,突變率(mutationrate)往往是很低的。所謂突變率是指【查看全文】
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2013年
10月 -
從組織中獲取DNA難嗎?不難,真不難。高一就有開設的從雞血中獲取DNA的生物實驗課,很簡單的幾步就可以得到DNA。但要想獲取高質(zhì)量的DNA,尤其是從一些富含多糖、多酚、淀粉、纖維和蛋白的組織,后面用于酶切、高通量測序大片段文庫的構建,還是有一定的難度的。zui近協(xié)助北京農(nóng)業(yè)生物技術研究中心一個老師提取桃葉片DNA還是遇到了一些困難,因為老師要做桃的個體重測序,因此對DNA的要求還是非常高的。之前跟其他很多老師交流植物DNA的提取,大多數(shù)目前仍然使用CTAB法,有些老師購買試劑盒進行提取,其實很多【查看全文】
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2013年
10月 -
1、PCR產(chǎn)物測序時出現(xiàn)重疊峰問題圖1(模板中有堿基缺失,往往是單一位點(1-1)或兩個位點(1-2)堿基缺失導致測序結(jié)果移碼)圖1-1圖1-2解決方法:將PCR產(chǎn)物克隆到質(zhì)粒(如T載體)中挑單克隆測序,或?qū)CR產(chǎn)物進行PAGE純化(至少瓊脂糖充分電泳后切膠純化)后再進行測序。問題圖2(PCR產(chǎn)物不純,含部分序列一致的兩種以上的片段,長度不一)圖2解決方法:主要原因是PCR產(chǎn)物沒有純化,含有部分序列一致的兩種以上長度不一的片段,將PCR產(chǎn)物進行PAGE純化(至少瓊脂糖充分電泳后切膠純化)后再進【查看全文】