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一文Get螢光素酶報(bào)告基因檢測(cè)試劑盒選擇指南
自1990年螢光素酶生物傳感器技術(shù)誕生，時(shí)至今日，螢光素酶報(bào)告基因的檢測(cè)系統(tǒng)被廣泛應(yīng)用于細(xì)胞信號(hào)通路、siRNA/miRNA、免疫應(yīng)答、藥物篩選等研究。螢光素酶報(bào)告基因檢測(cè)系統(tǒng)中具有代表性的是螢火蟲螢光素酶報(bào)告基因和海腎螢光素酶報(bào)告基因，由于兩種酶底物和發(fā)光顏色的區(qū)別，且在動(dòng)物體內(nèi)無內(nèi)源性表達(dá)，使其在單、雙報(bào)告實(shí)驗(yàn)中得到廣泛應(yīng)用。
檢測(cè)原理
螢火蟲螢光素酶是一種胞內(nèi)蛋白，大小為61KDa。在氧氣、ATP和鎂離子同時(shí)存在的條件下，催化底物螢火蟲螢光素氧化，生成氧化螢光素，并發(fā)出黃綠色光，其*發(fā)光波長(zhǎng)為560nm。
海腎螢光素酶也是一種胞內(nèi)蛋白，大小為36KDa。只需要氧氣就可以催化腔腸素，氧化生成高能產(chǎn)物coelenteramide，并發(fā)出藍(lán)光，其*發(fā)光波長(zhǎng)為465nm。
檢測(cè)方法差異
對(duì)于螢光素酶的化學(xué)發(fā)光與檢測(cè)模式上存在以下差異：
• 化學(xué)發(fā)光根據(jù)發(fā)光的形式和種類分為閃光型（flash-type）和輝光型（glow-type）兩種類型；
• 在檢測(cè)方法上分為非均質(zhì)檢測(cè)與均質(zhì)檢測(cè)；
那么在螢光素酶檢測(cè)實(shí)驗(yàn)中如何進(jìn)行報(bào)告基因檢測(cè)試劑的選擇呢？接下來讓我們一探究竟~
◎ 閃光型與輝光型差異
◎ 非均質(zhì)型與均質(zhì)型差異
• 非均質(zhì)型
優(yōu)勢(shì)：可留樣檢測(cè)（裂解液可保存用于后續(xù)檢測(cè)）；
劣勢(shì)：操作繁瑣。
• 均質(zhì)型
優(yōu)勢(shì)：操作簡(jiǎn)單（裂解檢測(cè)僅需一步）；
劣勢(shì)：不可留樣檢測(cè)。
檢測(cè)方法選擇
好啦！以上說了這么多，相信大家已經(jīng)明確了自己的需求啦~
精品推薦
◎ 非均質(zhì)閃光型報(bào)告基因檢測(cè)（貨號(hào)：11401、11402）
• 產(chǎn)品特點(diǎn)
1. 裂解能力更強(qiáng)：能夠*裂解絕大部分種類細(xì)胞。
2. 信號(hào)更強(qiáng)：能夠精準(zhǔn)檢測(cè)弱啟動(dòng)子的表達(dá)。
3. 靈敏度更高：可檢測(cè)低至10‐20摩爾螢光素酶分子。
4. 線性范圍更廣：線性檢測(cè)范圍超過酶濃度的8個(gè)數(shù)量級(jí)。
• 應(yīng)用方向
精準(zhǔn)測(cè)量轉(zhuǎn)錄調(diào)控，miRNA靶基因驗(yàn)證，轉(zhuǎn)錄因子和啟動(dòng)子研究等。
• 數(shù)據(jù)展示
圖1. Yeasen（貨號(hào)：11402）熒光強(qiáng)度與P品牌相當(dāng)，可替換進(jìn)口品牌。
◎ 均質(zhì)型輝光型報(bào)告基因檢測(cè)（貨號(hào)：11404、11405）
• 產(chǎn)品特點(diǎn)
1. 信號(hào)穩(wěn)定：半衰期長(zhǎng)（達(dá)2h），非常適用于高通量檢測(cè)，再也不用擔(dān)心螢光信號(hào)淬滅的問題。
2. 操作簡(jiǎn)便：只需要加樣-讀值，即可完成實(shí)驗(yàn)，擠出更多時(shí)間發(fā)paper。
3. 準(zhǔn)確度高：我有海腎螢光素酶的底物——腔腸素，可校正孔間細(xì)胞數(shù)量、轉(zhuǎn)染效率的誤差。
4. 兼容性好：可用于多種常用細(xì)胞培養(yǎng)液，如RPMI 1640、DMEM 、MEM-α、F12、DMEM/F12等。
5. 無刺激性氣味：還你一個(gè)清新愉快的實(shí)驗(yàn)室環(huán)境。
• 應(yīng)用方向
Fc effector檢測(cè)系統(tǒng)，免疫檢查點(diǎn)檢測(cè)系統(tǒng)( immune checkpoint assays)，細(xì)胞因子、生長(zhǎng)因子檢測(cè)和抗體內(nèi)化研究的檢測(cè)系統(tǒng)等。
• 數(shù)據(jù)展示
圖2. Yeasen（貨號(hào)：11405）熒光強(qiáng)度和穩(wěn)定性與P進(jìn)口品牌相當(dāng)。
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