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何謂限制性內(nèi)切酶？
限制性內(nèi)切酶是一種能夠識(shí)別雙鏈DNA分子中特定核苷酸序列，并在特定位置切割DNA鏈中的磷酸二酯鍵的一類酶，簡(jiǎn)稱限制酶。
▲ BamHI、KpnI、EcoRV酶切示意圖
限制性內(nèi)切酶的命名規(guī)則
縮寫 | 全名 | 含義 |
B | Bacillus | 屬名第一個(gè)字母 |
st | stearothermophilus | 種名前兩個(gè)字母 |
E | ET | 株系名第一個(gè)字母 |
II | 第二個(gè)發(fā)現(xiàn) | 在此類細(xì)菌中發(fā)現(xiàn)的順序 |
限制性內(nèi)切酶的分類
根據(jù)結(jié)構(gòu)的復(fù)雜程度、作用方式與輔因子的區(qū)別，限制性內(nèi)切酶可分為四大類，以下內(nèi)容總結(jié)了各類的特點(diǎn)和典型酶種：
Type Ⅰ
• 特點(diǎn)：
2.能夠識(shí)別DNA特定序列，切割位點(diǎn)距離識(shí)別位點(diǎn)不定，可達(dá)數(shù)千個(gè)堿基之遠(yuǎn)；
3.作用時(shí)需要ATP。
• 典型酶種：EcoB、Ecok等
Type Ⅱ
• 特點(diǎn)：
2.識(shí)別序列多為短的回文序列（一般為4-8bp），酶切位點(diǎn)通常就是所識(shí)別序列，特異性切割；
3.作用時(shí)需要Mg2+；
• 典型酶種：HindII、NotI等
Type Ⅲ
• 特點(diǎn)：
2.切割位點(diǎn)大約距離識(shí)別位點(diǎn)24-26bp；
3.作用時(shí)需要ATP。
• 典型酶種：Hinflll等
Type Ⅳ
• 特點(diǎn)：
1.僅切割被甲基化修飾了的DNA序列；
2.切割位點(diǎn)距離識(shí)別位點(diǎn) 30 bp左右。
• 典型酶種：MrcA、McrBC等
除了以上分類，根據(jù)識(shí)別和切割位點(diǎn)的異同可以分為3類，如下表所示：
內(nèi)切酶類別 | 特點(diǎn) | 典型酶種 |
Type I | 1、同時(shí)具有識(shí)別切割和修飾活性； 2、能夠識(shí)別DNA特定序列，切割位點(diǎn)距離識(shí)別位點(diǎn)不定，可達(dá)數(shù)千個(gè)堿基之遠(yuǎn)； 3、作用時(shí)需要ATP。 | EcoB、EcoK等 |
Type II | 1、只具有識(shí)別切割的作用； 2、識(shí)別序列多為短的回文序列（一般為4-8bp），酶切位點(diǎn)通常就是所識(shí)別序列，特異性切割； 3、作用時(shí)需要Mg2+； 4、分子克隆中的一類限制酶。 | HindIII，NotI等 |
Type III | 1、同時(shí)具有識(shí)別切割和修飾活性； 2、切割位點(diǎn)大約距離識(shí)別位點(diǎn)24-26bp； 3、作用時(shí)需要ATP。 | HinfIII等 |
Type IV | 1、僅切割被甲基化修飾了的DNA序列； 2、切割位點(diǎn)大約距離識(shí)別位點(diǎn) 30 bp左右。 | McrA，McrBC等 |
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