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普通胰島素是從豬牛等動(dòng)物胰腺中提取，提取后經(jīng)一系列生產(chǎn)工藝純化后，才應(yīng)用于糖尿病患者的治療，雖能降血糖，但其副作用極大。與動(dòng)物胰島素相比，人胰島素的副作用小、療效更確切。但糖尿病患者需借助于價(jià)格昂貴的進(jìn)口人胰島素進(jìn)行治療。因此國(guó)內(nèi)對(duì)重組人胰島素及其類似物的生產(chǎn)，刻不容緩。
重組人胰島素及其類似物的生產(chǎn)過(guò)程中，無(wú)動(dòng)物源性原料的使用是防止人畜共患病、提高安全性的重要手段。2020年版《中國(guó)藥典》增加了重組胰蛋白酶標(biāo)準(zhǔn)，推動(dòng)我國(guó)非動(dòng)物源性生物藥物的研發(fā)。
小翌為大家準(zhǔn)備好了性價(jià)比高的幾款無(wú)動(dòng)物源性蛋白酶，為胰島素生產(chǎn)等生物制藥領(lǐng)域提供助力：
重組胰蛋白酶
胰蛋白酶是一種絲氨酸蛋白酶，可特異切割賴氨酸及精氨酸C末端形成的肽鍵。重組胰蛋白酶多用大腸桿菌或酵母系統(tǒng)重組表達(dá)并經(jīng)過(guò)多步層析純化獲得，無(wú)糜蛋白酶等雜酶污染。重組胰蛋白酶與天然提取的胰蛋白酶相比具有相同的特性，其氨基酸序列與豬源胰蛋白酶序列同源。因其無(wú)動(dòng)物源污染性和純度高，在醫(yī)藥開(kāi)發(fā)、生化研究、蛋白組學(xué)等領(lǐng)域中有著廣泛的應(yīng)用。
翌圣目前可提供2款重組胰蛋白酶，分別為藥典級(jí)（Cat#40512ES）、質(zhì)譜級(jí)（Cat#20416ES）
藥典級(jí)：大腸桿菌表達(dá)的重組胰蛋白酶，氨基酸序列與豬胰腺來(lái)源的胰蛋白酶全一致，生產(chǎn)過(guò)程不使用任何動(dòng)物源原料，無(wú)外源性的病毒污染，可替代豬胰腺來(lái)源胰蛋白酶應(yīng)用于各種生物技術(shù)過(guò)程中，如：細(xì)胞培養(yǎng)、細(xì)胞發(fā)酵、蛋白質(zhì)的酶解或各種組織的細(xì)胞分離等。本產(chǎn)品純度高、不含雜酶、宿主蛋白和 DNA 殘留量符合藥典標(biāo)準(zhǔn)，避免了雜質(zhì)對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)的影響，最適pH為7.0-9.0，穩(wěn)定pH為2±0.5。
質(zhì)譜級(jí)：畢赤酵母表達(dá)的重組豬胰蛋白酶，在GMP法規(guī)下生產(chǎn)，不含任何動(dòng)物源成分，無(wú)動(dòng)物源性的病毒污染，天然缺乏糜蛋白酶活性，并已過(guò)濾除菌。胰蛋白酶活性以國(guó)際通用活性（USP）為準(zhǔn)，優(yōu)于進(jìn)口同類產(chǎn)品，其中β-Trypsin的HPLC含量可達(dá)80%以上，儲(chǔ)存穩(wěn)定性高，蛋白質(zhì)組學(xué)酶解漏切率比進(jìn)口產(chǎn)品低50%?？商娲鹊鞍酌甘褂?，且有很多優(yōu)勢(shì)，如無(wú)雜酶活性，高穩(wěn)定性，高活性；胰蛋白酶容易自切產(chǎn)生自身自切片段影響質(zhì)譜分析結(jié)果，而重組胰蛋白酶（質(zhì)譜級(jí)）通過(guò)甲基化修飾和突變保證其不自切，尤其適用于蛋白組學(xué)領(lǐng)域，如蛋白質(zhì)質(zhì)譜、測(cè)序、肽圖譜分析。
賴氨酰內(nèi)切酶（Lys-C）是來(lái)源于無(wú)色桿菌的一種絲氨酸蛋白酶，識(shí)別位點(diǎn)為蛋白質(zhì)中的賴氨酸，可高度特異性的水解賴氨酸羧基側(cè)的酰胺、酯和肽鍵，酶切速率及特異性均高于胰蛋白酶?？蓡为?dú)使用或與胰蛋白酶聯(lián)合使用，確保酶切效率，降低漏切率。使用胰蛋白酶或賴氨酰內(nèi)切酶酶切獲得去B鏈30位氨基酸殘基的胰島素前體(DesB30胰島素)，是重組胰島素的生產(chǎn)過(guò)程極其重要的一環(huán)。
翌圣重組賴氨酰內(nèi)切酶（質(zhì)譜級(jí)）是由大腸桿菌表達(dá)，不含有其他雜蛋白酶（如Lys-N、Arg-C等絲氨酸類蛋白酶），具有與天然賴氨酰內(nèi)切酶相同的特異性和活力。具有活性高、穩(wěn)定性好、純度高，無(wú)動(dòng)物源性的特點(diǎn)。最適的反應(yīng)pH為9.0-9.5，最適反應(yīng)溫度為30-37℃，在4 M尿素或者0.1% SDS存在的情況下仍可保持較高的酶活性?？蓱?yīng)用于蛋白質(zhì)分析，如蛋白質(zhì)質(zhì)譜、測(cè)序、肽圖譜分析及賴氨酸相關(guān)衍生物合成。
羧肽酶B又稱肽酰-L-賴氨酸（L-賴氨酸）水解酶、精蛋白酶，專一水解蛋白質(zhì)C-末端堿性氨基酸（賴氨酸、精氨酸、組氨酸）的氨基端；分子量為33.8 kD，等電點(diǎn)為6.0，最適pH為7.5-9.0。羧肽酶B的活性受精氨酸、賴氨酸的競(jìng)爭(zhēng)性抑制，金屬離子螯合劑如EDTA等抑制酶活。
翌圣重組羧肽酶B采用大腸桿菌表達(dá)，在GMP法規(guī)下生產(chǎn)，不含任何動(dòng)物源成分，無(wú)動(dòng)物源性的病毒污染，氨基酸序列與大鼠胰腺羧肽酶B全一致，具有與動(dòng)物源性羧肽酶B相同的酶學(xué)性質(zhì)，可替代動(dòng)物源性羧肽酶 B用于各種生物技術(shù)過(guò)程中, 如重組胰島素及其類似物的生產(chǎn)、蛋白質(zhì)C-末端氨基酸的測(cè)定、蛋白質(zhì)C-末端組氨酸標(biāo)簽的去除、其他重組多肽類物質(zhì)的生產(chǎn)、某些特殊化合物的酶促合成。
雙堿性內(nèi)切酶又稱為Kex2蛋白酶、YSCF蛋白酶，在酵母體內(nèi)Kex2蛋白酶負(fù)責(zé)加工killer toxin和α-factor的前體，是一種鈣離子依賴型的絲氨酸蛋白酶，能特異性識(shí)別和切割A(yù)rg-Arg、Lys-Arg等雙堿性氨基酸羧基端肽鍵。與胰蛋白酶（識(shí)別一個(gè)氨基酸殘基，對(duì)于目的蛋白序列的限制性較強(qiáng)，且可能產(chǎn)生錯(cuò)切等問(wèn)題）不同，Kex2不能識(shí)別和切割單一堿性氨基酸即精氨酸或賴氨酸的羧基端肽鍵，所以Kex2這類識(shí)別數(shù)個(gè)氨基酸殘基、特異性較高的酶的生產(chǎn)制備對(duì)酶切的正確性尤為重要。并且Kex2蛋白酶活性不受常規(guī)的絲氨酸蛋白酶抑制劑如抑肽酶、PMSF、TPCK所抑制。
翌圣重組Kex2蛋白酶是由畢赤酵母表達(dá)，在GMP法規(guī)下生產(chǎn)，不含任何動(dòng)物源成分，無(wú)動(dòng)物源性的病毒污染，與天然的釀酒酵母Kex2酶具有相同的酶特異性。最適作用pH為pH9.0，穩(wěn)定儲(chǔ)存的pH為5.0-6.0。生物制藥領(lǐng)域常用Kex2蛋白酶聯(lián)合羧肽酶B用于重組胰島素及其類似物、GLP-1、重組多肽的生產(chǎn)制備，還可用于蛋白質(zhì)的酶解和肽圖分析、測(cè)序及融合標(biāo)簽的切割等。
選購(gòu)指南
貨號(hào) | 40512ES | 20416ES | 20420ES | 20417ES | 20418ES |
產(chǎn)品名稱 | 重組胰蛋白酶 （粉末） | 重組胰蛋白酶 （質(zhì)譜級(jí)） | 重組賴氨酰內(nèi)切酶（質(zhì)譜級(jí)） | 重組羧肽酶B | 重組雙堿性內(nèi)切酶 |
來(lái)源 | 大腸桿菌 | 畢赤酵母 | 大腸桿菌 | 大腸桿菌 | 畢赤酵母 |
性狀 | 白色或類白色結(jié)晶性粉末 | 無(wú)色至淡黃色，澄清液體 | 無(wú)色至淡黃色，澄清液體 | 白色、類白色、類黃色粉末 | 白色、類白色粉末 |
純度 | β-trypsin≥70% α-trypsin≤20% | β-trypsin＞80% α-trypsin＜20% SUMO標(biāo)簽蛋白 | 單一主條帶 | 單一主條帶 | 單一主條帶 |
比活性 | ≥3800 USP units/mg 蛋白 | >6800 USP Unit/mg 蛋白 | ≥3.0 AU/mg | ≥170 USP units/mg 蛋白 | ≥10.0 units/mg 蛋白 |
切割位點(diǎn) | 特異切割賴氨酸或者精氨酸殘基中的羧基端肽鍵 | 特異切割賴氨酸或者精氨酸殘基中的羧基端肽鍵 | 特異性切割賴氨酸羧基側(cè)的酰胺、酯和肽鍵 | 專一水解蛋白質(zhì)C-末端堿性氨基酸（賴氨酸、精氨酸）的氨基端 | 特異性識(shí)別和切割Arg-Arg、Lys-Arg等雙堿性氨基酸羧基端肽鍵 |
應(yīng)用 | 可替代豬胰腺來(lái)源胰蛋白酶應(yīng)用于各種生物技術(shù)過(guò)程中，如：細(xì)胞培養(yǎng)、細(xì)胞發(fā)酵、蛋白質(zhì)的酶解或各種組織的細(xì)胞分離等。 重組蛋白方面： 1. 重組胰島素生產(chǎn)； | 可替代重組胰蛋白酶使用，且純度更高、活性更好。其不自切的特性，尤其適用于蛋白質(zhì)分析，如蛋白質(zhì)質(zhì)譜、測(cè)序、肽圖譜分析。 | 1.重組胰島素及其類似物的生產(chǎn)。 2.蛋白質(zhì)分析，如蛋白質(zhì)質(zhì)譜、測(cè)序、肽圖譜分析。 3.賴氨酸相關(guān)衍生物合成。 | 1. 重組胰島素及其類似物的生產(chǎn)。 2. 蛋白質(zhì)C-末端氨基酸的測(cè)定。 3. 蛋白質(zhì)C-末端組氨酸標(biāo)簽的去除。 4. 其他重組多肽類物質(zhì)的生產(chǎn)。 5. 某些特殊化合物的酶促合成 | 1. 重組胰島素及其類似物的前體加工 2. 多肽藥物生產(chǎn)中的的工藝酶切 3. 生物研究：蛋白質(zhì)的酶解和肽圖分析、測(cè)序等。 4. 可用于融合標(biāo)簽的切割 |
產(chǎn)品優(yōu)勢(shì)
質(zhì)量高：純度高，比活高，宿主蛋白殘留小于生物制品限度要求；
無(wú)動(dòng)物源性：重組生產(chǎn)，生產(chǎn)過(guò)程不使用任何動(dòng)物源原料，無(wú)外源性病毒污染；
GMP生產(chǎn)：可提供GMP級(jí)別產(chǎn)品；
供應(yīng)穩(wěn)定：批量生產(chǎn)，可保證穩(wěn)定連續(xù)的批次生產(chǎn)；產(chǎn)品批次間無(wú)差異，質(zhì)量穩(wěn)定；
多形式供貨：可供應(yīng)液體和凍干粉2種形式，液體裝方便使用，凍干粉方便運(yùn)輸和儲(chǔ)存。
產(chǎn)品信息
產(chǎn)品名稱 | 貨號(hào) | 規(guī)格 | 目錄價(jià)/元 |
PerfCell™ Recombinant Trypsin（powder） 重組胰蛋白酶（粉末） | 40512ES10/60/80 | 10mg/100 mg /1 g | 328/2298/16188 |
Recombinant Trypsin（MS-SAFE） 重組胰蛋白酶（質(zhì)譜級(jí)） | 20416ES60 | 100 µg | 595 |
Carboxypeptidase B, Recombinant, Expressed in E.coli 大腸桿菌表達(dá)重組羧肽酶B | 20417ES03/10 | 1 mg/10 mg | 735/2285 |
Paired-basic endopeptidase, Recombinant, Expressed in Yeast 酵母表達(dá)重組雙堿性內(nèi)切酶 | 20418ES60 | 100 µg | 1945 |
Recombinant Lys-C（MS-SAFE） 重組賴氨酰內(nèi)切酶（質(zhì)譜級(jí)） | 20420ES20/60 | 20 µg/5×20 µg | 1295/4995 |
