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2024年7月4日，成都生物制品研究所研制的四價(jià)HPV疫苗上市申請(qǐng)獲得NMPA受理，這也是國(guó)內(nèi)自研 四價(jià)的預(yù)防因人乳頭瘤病毒所引起的宮頸癌疫苗。根據(jù)國(guó)家癌癥中心基于腫瘤登記及隨訪(fǎng)監(jiān)測(cè)最新數(shù)據(jù)，在JNCC上發(fā)布2022年中國(guó)惡性腫瘤疾病研究情況顯示【1】，子宮頸癌位列女性癌癥發(fā)病人數(shù)的前五位，發(fā)病增長(zhǎng)率僅次于甲狀腺癌，因此防治需要同時(shí)進(jìn)行，以減少病人發(fā)病率和延長(zhǎng)存活期。
圖.信息源自CDE
宮頸癌類(lèi)器官（organoids）是指利用宮頸腫瘤細(xì)胞等在體外培養(yǎng)出的3D細(xì)胞培養(yǎng)物并具有一定的空間結(jié)構(gòu)組織類(lèi)似物。宮頸癌類(lèi)器官可以作為疾病模型，相較于傳統(tǒng)2D疾病模型，其在闡明疾病的發(fā)展、穩(wěn)態(tài)性和發(fā)病機(jī)理等與體內(nèi)環(huán)境更加接近，能作為宮頸癌治療、診段和發(fā)病機(jī)制研究的理想試驗(yàn)?zāi)Ｐ汀?/span>
宮頸癌類(lèi)器官構(gòu)建實(shí)驗(yàn)步驟
1、取材：標(biāo)本離體后，盡快取材。采用無(wú)菌器械，保證無(wú)菌環(huán)境，將腫瘤組織放入含有5 mL的原代組織保存液的 15 mL 離心管中，4℃轉(zhuǎn)運(yùn)；
2、清洗：在生物安全柜中取出樣品管，去除組織保存液，加入適量冷的添加有雙抗的 PBS，反復(fù)清洗后，去除 PBS；
3、重復(fù)清洗：重復(fù)第 2 步驟 3 次；
4、組織處理：去除 PBS緩沖液后，將組織塊移至10 cm含10 mL冷原代 組織保存液的無(wú)菌培養(yǎng)皿中，用無(wú)菌眼科顯微剪將組織剪碎（直徑約 0.5mm~1mm）；
5、重復(fù)清洗：使用常溫PBS，重復(fù)第2步驟3次；
6、收集組織碎片，加入組織消化液消化20~30 min，過(guò)70 μm篩網(wǎng)，收集宮頸癌細(xì)胞；
7、紅細(xì)胞裂解：加入10 mL紅細(xì)胞裂解緩沖液，室溫下在翹板搖床上搖10 min；
8、重復(fù)清洗：裂解完畢，使用常溫 DMEM/F12，重復(fù)第 2步驟3次；
9、類(lèi)器官種板：調(diào)整細(xì)胞密度為2~3×106，與基質(zhì)膠1:1均勻混合，將細(xì)胞混懸液以40-60 uL每孔種在24孔板中，37℃放置15~30 min，加入預(yù)熱的類(lèi)器官培養(yǎng)液，每個(gè)孔 750 uL；
10、類(lèi)器官培養(yǎng)：將培養(yǎng)板放在 37℃ CO2培養(yǎng)箱培養(yǎng),每2天更換培養(yǎng)液。加入培養(yǎng)液時(shí)，吸頭朝向側(cè)壁，緩慢加入；
11、類(lèi)器官觀察：每天觀察類(lèi)器官并拍照，了解初始類(lèi)器官數(shù)量、增殖速度、形態(tài)、微生物污染情況等。
實(shí)驗(yàn)結(jié)果
注：P為代次，d為培養(yǎng)天數(shù)
FAQ
基質(zhì)膠的操作要注意哪些事項(xiàng)？
所有操作需在無(wú)菌環(huán)境下進(jìn)行，應(yīng)使用預(yù)冷的移液器以保證基質(zhì)膠呈勻漿狀。
獲取臨床樣本，如何避免污染？
①取材時(shí)盡量保證無(wú)菌取材；
②提取前可以用含雙抗的PBS浸泡幾分鐘：常見(jiàn)與外界環(huán)境有接觸可能的胃、腸、膀胱等位置腫瘤建議用含3%~5%雙抗的PBS浸泡5-10 min，其他常見(jiàn)腫瘤用含1%~2%雙抗的PBS浸泡5min左右；
③提取細(xì)胞過(guò)程中所用試劑均加1%雙抗及合適濃度的原代抗生素。
腫瘤組織采集、保存、運(yùn)輸注意事項(xiàng)
盡可能多采集腫瘤細(xì)胞含量高的腫瘤組織，并縮短組織樣本在空氣中暴露的時(shí)間，以減少污染概率；采集的腫瘤組織樣本盡快置于裝有專(zhuān)用樣本保存液的無(wú)菌管中，低溫（4 ℃左右）下快速運(yùn)轉(zhuǎn)至檢測(cè)單位（盡量保證采樣后2~4 h內(nèi)送到）。
病灶和癌旁培養(yǎng)出的類(lèi)器官有區(qū)別嗎？腫瘤組織的取材部位有什么要求？
有差別，腫瘤本身具有異質(zhì)性，不同來(lái)源的類(lèi)器官之間存在差異是很常見(jiàn)的現(xiàn)象，從形態(tài)上看，原發(fā)病灶來(lái)源的類(lèi)器官比癌旁來(lái)源的類(lèi)器官更具有侵襲性的結(jié)構(gòu)，一般病灶形態(tài)上更加不規(guī)則一些。如果希望在建?；蛩幬锖Y選方面盡量減小誤差，可以在活性好的地方多位置取樣。
產(chǎn)品選擇
產(chǎn)品名稱(chēng) | 產(chǎn)品編號(hào) | 規(guī)格 |
Cebrary®Tissue Digestion Solution 組織消化液 | 41423ES10/30 | 10/30 mL |
Cebrary®Cell recovery solution for Organoid類(lèi)器官回收液 | 41421ES30/60 | 30/100 mL |
Cebrary®Cell freezing medium for Organoid 類(lèi)器官凍存液 | 41422ES30/60 | 30/100 mL |
相關(guān)產(chǎn)品
產(chǎn)品類(lèi)型 | 產(chǎn)品名稱(chēng) | 產(chǎn)品編號(hào) | 規(guī)格 |
基本濃度 | Ceturegel® Matrix LDEV-Free基質(zhì)膠 | 40183ES08/10 | 5/10 mL |
Ceturegel® Matrix Phenol Red-Free，LDEV-Free 基質(zhì)膠 | 40184ES08/10 | 5/10 mL | |
低生長(zhǎng)因子 | Ceturegel® Matrix GFR，LDEV-Free 基質(zhì)膠 | 40185ES08/10 | 5/10 mL |
Ceturegel® Matrix GFR， Phenol Red-Free，LDEV-Free 基質(zhì)膠 | 40186ES08/10 | 5/10 mL | |
高濃度 | Ceturegel® Matrix High Concentration，LDEV-Free 基質(zhì)膠 | 40187ES08/10 | 5/10 mL |
Ceturegel® Matrix High Concentration，Phenol Red-Free，LDEV-Free 基質(zhì)膠 | 40188ES08/10 | 5/10 mL | |
Ceturegel® Matrix High Concentration，GFR，LDEV-Free 基質(zhì)膠 | 40189ES08/10 | 5/10 mL | |
干細(xì)胞專(zhuān)用 | Ceturegel® Matrix hESC-Qualified，LDEV-Free 基質(zhì)膠 | 40190ES08/10 | 5/10 mL |
類(lèi)器官專(zhuān)用 | Ceturegel® Matrix for Organoid culture，Phenol Red-Free，LDEV-Free 基質(zhì)膠 | 40191ES08/10 | 5/10 mL |
鼠尾膠原 | Collagen, Type I , from rat tail 鼠尾膠原蛋白I | 40125ES10/50 | 2/10 mL |
Cebrary® Collagen, Type I , from mouse tail鼠尾膠原蛋白I型 | 40136ES10/50 | 2/10 mL |
