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20515ES08MBPSep Dextrin Agarose Resin 6FF MBP標(biāo)簽蛋白高度交聯(lián)純化樹(shù)脂
| 參考價(jià): | 面議 |
具體成交價(jià)以合同協(xié)議為準(zhǔn)- 20515ES08 產(chǎn)品型號(hào)
- Yeasen/翌圣生物 品牌
- 生產(chǎn)商 廠商性質(zhì)
- 上海市 所在地
訪問(wèn)次數(shù)：869更新時(shí)間：2022-02-10 11:57:08
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產(chǎn)品簡(jiǎn)介
產(chǎn)品介紹
MBPSep Dextrin Agarose Resin 6FF
MBP標(biāo)簽蛋白高度交聯(lián)純化樹(shù)脂
產(chǎn)品信息
產(chǎn)品名稱 | 產(chǎn)品編號(hào) | 規(guī)格 | 儲(chǔ)存 | 價(jià)格（元） |
MBPSep Dextrin Agarose Resin 6FF （MBP標(biāo)簽蛋白高度交聯(lián)純化樹(shù)脂） | 20515ES08 | 5ml | 4℃ | 858.00 |
MBPSep Dextrin Agarose Resin 6FF （MBP標(biāo)簽蛋白高度交聯(lián)純化樹(shù)脂） | 20515ES25 | 25ml | 4℃ | 2958.00 |
產(chǎn)品描述
MBPSep Dextrin Agarose Resin是一種純化帶有麥芽糖結(jié)合蛋白（MBP）標(biāo)簽蛋白的親和層析介質(zhì)，MBP可促進(jìn)連接蛋白的正確折疊，增加在細(xì)菌中過(guò)量表達(dá)的融合蛋白的溶解性，尤其是真核蛋白。MBPSep Dextrin Agarose Resin 6FF可以一步純化MBP融合蛋白，結(jié)合的融合蛋白可以用10mM麥芽糖進(jìn)行溫和洗脫，保護(hù)了目的蛋白的活性，MBP融合部分后續(xù)可用位點(diǎn)特異性蛋白酶切除。
此外，本品以高度交聯(lián)的6%瓊脂糖凝膠為基質(zhì)，具有更高的物理化學(xué)特性，可以耐受更高的壓力，在相對(duì)較高的流速下，實(shí)現(xiàn)對(duì)目的蛋白的純化，更適于工業(yè)大規(guī)模蛋白的純化。
產(chǎn)品性質(zhì)
基質(zhì)（Matrix） | 高度交聯(lián)的6%瓊脂糖微球 |
配體（Ligand） | 糊精 |
孔徑（Bead size） | 45-165μm |
載量（Capacity） | ＞10mg MBP蛋白（80kDa） |
zui大壓力（PressureMax） | 0.3 MPa, 3bar |
pH穩(wěn)定范圍（pH range） | 3-12 |
儲(chǔ)存緩沖液（Buffer） | 20%乙醇 |
運(yùn)輸和保存方法
冰袋運(yùn)輸。4℃保存，有效期2年。
需準(zhǔn)備試劑
所用水和Buffer在使用前用0.22μm或0.45μm濾膜過(guò)濾除菌。
結(jié)合/洗雜緩沖液：20 mM Tris-HCl, 200mM NaCl, 1mM EDTA, pH7.4
洗脫緩沖液：20mM Tris-HCl, 1mM EDTA，10mM 麥芽糖, pH7.4
【注】：結(jié)合/洗雜緩沖液或者洗脫緩沖液中可加入1mM DTT或10mM β-巰基乙醇。
使用方法
【注】樣品在上樣前用0.22μm或0.45μm濾膜過(guò)濾，減少雜質(zhì)以防阻塞柱子。
1 MBPSep Dextrin Agarose Resin的裝填（適用于各種中壓色譜層析柱的填裝）
1）用去離子水沖洗層析柱底篩板與接頭，確保柱底篩板上無(wú)氣泡，關(guān)閉柱底出口，并在柱底部留出1-2cm的去離子水。
2）將樹(shù)脂懸浮起來(lái)，小心的將漿液連續(xù)地倒入層析柱中。用玻璃棒沿著柱壁倒入漿液可減少氣泡的產(chǎn)生。
3）如果使用儲(chǔ)液器，應(yīng)立即在層析柱和儲(chǔ)液器中加滿水，將進(jìn)樣分配器放置于漿液表面，連接至泵上，避免在分配器或進(jìn)樣管中產(chǎn)生氣泡。
4）打開(kāi)層析柱底部出口，開(kāi)起泵，使其在設(shè)定的流速下進(jìn)行。zui初應(yīng)讓緩沖液緩慢流過(guò)層析柱，然后緩慢增加至zui終流速， 這樣可避免液壓對(duì)所形成柱床的沖擊，避免柱床形成的不均勻。如果達(dá)不到推薦的壓力或流速，可以用所使用泵的zui大流速，這樣也可以得到一個(gè)很好的裝填效果。
【注】：在隨后的色譜程序中，不要超過(guò)zui大裝柱流速的75%，當(dāng)柱床高度穩(wěn)定后，在zui后的裝柱流速下至少再上3倍柱床體積的去離子水。標(biāo)上柱床高度。
5）關(guān)閉泵，關(guān)閉層析柱出口。
6）如果使用儲(chǔ)液器，去除儲(chǔ)液器，將分配器至于層析柱中。
7）將分配器推向柱子至標(biāo)記的柱床高度處。允許裝柱液進(jìn)入分配器，鎖緊分配器接頭。
8）將裝填好的層析柱連接至泵或色譜系統(tǒng)中，開(kāi)始平衡。如果需要可以重新調(diào)整分配器。
2 樣品純化
1）平衡：用5倍柱體積的結(jié)合Buffer平衡柱子，使填料處于與目的蛋白相同的緩沖體系下，起到保護(hù)蛋白的作用。
2）上樣：Resin平衡后，加入蛋白樣品，使其與Resin充分接觸，提高目的蛋白回收率，收集流出液。
3）洗雜：用10-15倍柱體積的洗雜緩沖液進(jìn)行清洗，去除非特異性吸附的雜蛋白，收集洗雜液。
4）洗脫：使用5-10倍柱體積的洗脫緩沖液，收集洗脫液，即目的蛋白溶液。
5）清洗與保存：依次使用3倍柱體積的結(jié)合Buffer和5倍柱體積的去離子水平衡填料，zui后用5倍柱體積的20%的乙醇平衡，然后保存在等體積的20%乙醇中，置于4℃保存，防止填料被細(xì)菌污染。
3 SDS-PAGE檢測(cè)
將純化過(guò)程中得到的樣品（包括原始樣品、流出組分、洗雜及洗脫組分等）利用SDS-PAGE進(jìn)行檢測(cè)，判定其純化效果。
4 填料清洗
隨著非特異結(jié)合蛋白的增多和蛋白的聚集，會(huì)造成流速和結(jié)合載量性能下降，此時(shí)需對(duì)填料進(jìn)行清洗。
1）3倍柱體積的去離子水；
2）3倍柱體積的0.1%SDS或0.5M NaOH溶液；
3）3倍柱體積去離子水；
4）3倍柱體積20%乙醇，保存于4℃。
注意事項(xiàng)
1）請(qǐng)勿冷凍保存本產(chǎn)品。
2）MBPSep Dextrin Agarose Resin6FF使用前一定要充分顛倒若干次，使瓊脂糖珠混合均勻。
3）所有操作過(guò)程中，樣本需要在4℃或冰上操作。
4）為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。
附表 問(wèn)題及解決方案
問(wèn)題 | 可能原因 | 推薦解決方案 |
柱子反壓過(guò)高 | 填料被堵塞 | 清洗樹(shù)脂。 |
裂解液中含有微小的固體顆粒，建議上樣前用0.22μm或0.45μm濾膜過(guò)濾，或離心去除。 | ||
洗脫組分中無(wú)目的蛋白 | 目的蛋白未表達(dá) | 優(yōu)化實(shí)驗(yàn)方案，確保目的蛋白表達(dá) |
樣品或緩沖液中存在一些干擾因素如非離子去污劑 | 樣品透析或用結(jié)合buffer稀釋 | |
細(xì)胞產(chǎn)生大量的淀粉酶影響結(jié)合力 | 培養(yǎng)基中添加葡萄糖，抑制淀粉酶的表達(dá) | |
融合蛋白使麥芽糖結(jié)合位點(diǎn)阻塞或扭曲影響了目的蛋白的結(jié)合力 | 更換載體 | |
柱子結(jié)合時(shí)間太短 | 將樣品與樹(shù)脂振蕩孵育4℃2h或更長(zhǎng)時(shí)間 | |
洗脫樣品較雜 | 目的蛋白降解 | 加一些蛋白酶抑制劑，如PMSF、EDTA等 |
平衡/洗雜不充分 | 增加平衡液體積，確保樹(shù)脂充分平衡/洗雜。 |
相關(guān)產(chǎn)品
產(chǎn)品名稱 | 產(chǎn)品編號(hào) | 規(guī)格 | 價(jià)格（元） |
20516ES03 | MBPSep Dextrin 6FF Chromatography Column, 1ML （MBP標(biāo)簽蛋白純化預(yù)裝柱，1ML） | 1ml | 358.00 |
20516ES08 | MBPSep Dextrin 6FF Chromatography Column, 1ML （MBP標(biāo)簽蛋白純化預(yù)裝柱，1ML） | 5×1ml | 1258.00 |
20517ES03 | MBPSep Dextrin 6FF Chromatography Column, 5ML （MBP標(biāo)簽蛋白純化預(yù)裝柱，5ML） | 5ml | 1238.00 |
20517ES25 | MBPSep Dextrin 6FF Chromatography Column, 5ML （MBP標(biāo)簽蛋白純化預(yù)裝柱，5ML） | 5×5ml | 3958.00 |
60126ES02 | EDTA, Free Acid 乙二胺四乙酸 | 500g | 200.00 |
60127ES02 | EDTA Disodium Salt Dihydrate 乙二胺四乙酸二鈉鹽二水 | 500g | 180.00 |
20311ES10 | DTT 二硫蘇糖醇 | 10g | 280.00 |
60102ES76 | Tris Base 三(羥甲基)氨基甲烷 | 500g | 108.00 |
