產(chǎn)品信息

產(chǎn)品描述

Exosome（外泌體）是由活細(xì)胞分泌的直徑約為30-150 nm的小囊泡，具有典型的脂質(zhì)雙分子層結(jié)構(gòu)；存在于細(xì)胞培養(yǎng)上清液、血清、血漿、唾液、尿液、羊水以及其它生物體液中；Exosome攜帶有多種蛋白質(zhì)、脂類、DNA和RNA等重要信息，不僅在細(xì)胞與細(xì)胞間的物質(zhì)和信息傳遞中起重要作用，更有望成為多種疾病的早期診斷標(biāo)志物。

本試劑盒采用*的分離技術(shù)，可以快速從乳液中獲得大量完整的外泌體顆粒，適用于下游的細(xì)胞共培養(yǎng)、電鏡分析、Western Blot、熒光定量（qPCR）和高通量測(cè)序等應(yīng)用。

產(chǎn)品組分

運(yùn)輸和保存方法

室溫運(yùn)輸，本試劑盒可于室溫穩(wěn)定保存24個(gè)月。

注意事項(xiàng)

1、產(chǎn)品只針對(duì)乳液樣本，不適用其它血清/血液或者是細(xì)胞培養(yǎng)上清中外泌體的抽提；如果需要進(jìn)行細(xì)胞上清外泌體分離，請(qǐng)選用細(xì)胞培養(yǎng)上清外泌體快速抽提試劑盒。

2、如果想要進(jìn)一步純化外泌體，可以使用相應(yīng)抗體包被的磁珠進(jìn)行親和純化。

3、為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。

4、本產(chǎn)品僅作科研用途！

操作方法

樣品預(yù)處理：

1、收集新鮮的樣品，置于冰上待用；若為凍存的樣品，可于冰箱取出后放于25℃水浴中解凍，待*融化后置于冰上待用。

2、取25 mL（單次樣品最佳提取量為50 mL）乳液樣品轉(zhuǎn)移至離心管中，4℃，10000×g離心20 min，轉(zhuǎn)移分層樣品中的中層乳清至新的離心管中。（離心后樣品分為三層，上層為脂質(zhì)層，中層為乳清層，下層為蛋白層。脂質(zhì)層應(yīng)致密、穩(wěn)定，若脂質(zhì)層松軟，不穩(wěn)定，且蛋白層沉淀較多，可重復(fù)此步驟。）

3，向乳清中加入Buffer-A，顛倒混勻離心管至呈現(xiàn)半透明狀，再加入Buffer-B，顛倒混勻后2℃至8℃靜置10min。（靜置結(jié)束后搖晃離心管，樣品應(yīng)呈現(xiàn)白色固體和透明液體混合物，若樣品仍為乳白色或是未呈現(xiàn)混合狀，可以適當(dāng)加入Buffer-A至液體透明。）

【注】：試劑用量可根據(jù)此表進(jìn)行等比例換算。

4，將樣品于4℃，10000×g離心10 min，收集上清液轉(zhuǎn)移至50 mL過濾柱中，4℃，3000×g離心2min。

5，收集過濾后的上清液至新的離心管中，加入和Buffer-B等量的Buffer-C顛倒混勻。

外泌體分離：

1、向預(yù)處理后的樣品中，按照下表加入Exosome isolation solution （其他樣品量根據(jù)表中試劑用量進(jìn)行等比例變換）。

【注】：試劑用量可根據(jù)此表進(jìn)行等比例換算。

2、蓋緊離心管蓋，渦旋振蕩1 min，放置于4℃冰箱靜置2 h。

3、取出裝有混合液的離心管，4℃，10,000×g離心60 min，棄上清（盡可能吸凈上清液），收集富含外泌體的沉淀。

4、吸取一定量體積的1×PBS溶液均勻吹打離心沉淀物，待其充分懸浮于PBS后，將懸液轉(zhuǎn)移至新的1.5 mL離心管中。

【注】加入1×PBS的量，建議根據(jù)預(yù)處理樣本的體積決定，預(yù)處理樣本體積：Exosome Buffer體積=40:1。

5、將含有重懸液的1.5 mL離心管于4℃，12,000×g離心5 min，棄沉淀，保留上清液，該上清液即富含外泌體顆粒的溶液。

【注】此時(shí)如果依然可以看到明顯的沉淀，建議重復(fù)步驟5，多次離心至無明顯沉淀。

6）外泌體的保存：純化后的外泌體可于4℃保存3天，分裝后于-80℃ 長(zhǎng)期保存，避免反復(fù)凍融。

外泌體除菌（可選）：

獲得的外泌體后期需要與細(xì)胞共培養(yǎng)，可以使用0.22 μm的濾器進(jìn)行過濾除菌。初次嘗試時(shí)，外泌體濃度在10-100 μg/mL內(nèi)做梯度摸索，選擇一個(gè)較為合適的條件。

HB220107