伴刀豆球蛋白A磁珠是表面共價(jià)偶聯(lián)了伴刀豆球蛋白 A（ConA）的超順磁性聚合物微球，具有單分散和磁反應(yīng)性強(qiáng)等特點(diǎn)。ConA磁珠在Ca2+和Mg2+存在的情況下，通過伴刀豆球蛋白 A與末端α-D-甘露糖基和α-D-葡萄糖基的親和作用，快速高效地分離純化多糖、糖蛋白和糖脂等生物分子，而且使用ConA磁珠分離或固定細(xì)胞非常便捷，并在后續(xù)清洗過程中大程度減少細(xì)胞丟失，也可以用于收集和固定細(xì)胞核，也可以直接用于CUT & Run和CUT & Tag（ChIP-seq實(shí)驗(yàn)的革新性技術(shù)）等實(shí)驗(yàn)。

產(chǎn)品性質(zhì)

儲(chǔ)存條件

2~8℃保存，有效期2年。

使用說明

以捕獲細(xì)胞和純化糖蛋白為例，用于Cut-Tag具體操作見12598ES試劑盒。

1. 緩沖液配置

1）自備試劑

2）自備設(shè)備和耗材：磁性分離架，旋轉(zhuǎn)混合儀，PCR管，微量移液器及吸頭（RNase-free）。

3）將磁珠恢復(fù)至室溫，且均勻重懸。

2. 樣品準(zhǔn)備（以哺乳動(dòng)物細(xì)胞為例）

1）準(zhǔn)備哺乳動(dòng)物細(xì)胞(1.0×104~1.0×105個(gè))，離心收集(4℃，600×g，3~5min)，小心吸棄上清；

2）加入 140 μL 結(jié)合緩沖液 ，充分混勻重懸細(xì)胞，離心收集(4℃，600×g，3~5min)，小心吸棄上清；

3）加入 90 μL 結(jié)合緩沖液，充分混勻重懸細(xì)胞。

【注】：貼壁較緊的細(xì)胞可使用   等部分消化獲得，對(duì)于動(dòng)物組織、植物或真菌細(xì)胞可通過特殊處理獲得分散的細(xì)胞或原生質(zhì)體進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。

3. 磁珠準(zhǔn)備

1）吸取10 μL均勻重懸的 Con A磁珠，加入40 μL 磁珠結(jié)合液，吹吸混合，磁吸棄上清。

2）加入10 μL 磁珠結(jié)合液，吹吸混合。

4. 細(xì)胞捕獲

1）將重懸在結(jié)合液中的ConA磁珠（步驟3）輕輕滴加在細(xì)胞懸液（步驟2）中，顛倒5次混勻后，置于旋轉(zhuǎn)儀上混勻，室溫孵育30 min 或者4 ℃過夜。

2）離心管在磁力架上放置1 min，吸棄上清。

3）取500ul清洗液加入磁珠中，用移液器輕柔吹打，重懸磁珠，再置于磁力架1 min，吸棄上清。

4）重復(fù)步驟3）洗滌3-4次。

5. 洗脫

1）糖蛋白的洗脫：加入50~250 μL洗脫液，置于翻轉(zhuǎn)混合儀上室溫孵育10~30 min，接著在磁力架上靜置 1 min，收集上清得到糖蛋白，可用于SDS-PAGE電泳或Western檢測(cè)

【注】：也可使用PNGase F酶切除糖基進(jìn)行洗脫。

2）細(xì)胞的洗脫：磁珠粒徑小，對(duì)細(xì)胞的生長(zhǎng)和活性影響較小，也可以選擇不洗脫。

注意事項(xiàng)

1. 磁珠應(yīng)避冷凍，否則可能會(huì)導(dǎo)致磁珠碎裂，性能下降。

2. 磁珠取用前應(yīng)恢復(fù)至室溫，且充分混勻；但不要?jiǎng)×艺鹗?，否則容易產(chǎn)生氣泡。

3. 建議樣本細(xì)胞活性不低于80% (細(xì)胞活性可以用臺(tái)盼藍(lán)染色來鑒定)。

4. ConA在Ca2+和Mn2+離子存在時(shí)才有活性，實(shí)驗(yàn)中應(yīng)用的溶液不能含有EDTA等螯合劑，否則會(huì)導(dǎo)致結(jié)合效率降低。

5. 水平旋轉(zhuǎn)時(shí)定時(shí)輕彈底部混勻，細(xì)胞量較多時(shí)易聚集干結(jié)。

6. 槍頭吸吹時(shí)要緩慢，避免產(chǎn)生過多氣泡；避免用10 μL小槍頭吹吸細(xì)胞；

7. 吸除管內(nèi)液體時(shí)，槍頭遠(yuǎn)離磁珠一端，避免槍頭粘連帶出磁珠。

8. 針對(duì)特定細(xì)胞類型和細(xì)胞量，可能需要增減磁珠用量以達(dá)到優(yōu)效果。

9. 本產(chǎn)品僅作科研用途！

10. 為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。