Brdu細胞增殖檢測

BrdU作為一種胸腺嘧啶核苷的類似物（其化學結構特點是胸腺嘧啶的堿基嘧啶環(huán)上與5位C原子連接的甲基被溴代替），像胸腺嘧啶核苷一樣可摻入到細胞合成的DNA中。當細胞處于DNA合成期而同時又有BrdU存在時, 就會有BrdU摻入新合成的DNA中，只要細胞不消亡，這種BrdU就在胞核的DNA中長期存留。摻入到DNA的BrdU可通過抗BrdU單克隆抗體在組織切片或細胞爬片上顯示。該方法能對細胞增值進行迅速而穩(wěn)定的測量, 而且標記BrdU的細胞只要不受到紫外線照射，對細胞本身沒有功能損害。
 
操作步驟
1. 細胞以1.5×105 /ml細胞數接種于直徑35ml培養(yǎng)皿中（內放置一蓋玻片），培養(yǎng)1天，用含0.4％FCS培養(yǎng)液同步化3天，使絕大多數細胞處于G0 期。
2. 終止細胞培養(yǎng)前，加入BrdU（終濃度為30μg/L），37℃，孵育40min。
3. 棄培養(yǎng)液，玻片用PBS洗滌3次。
4. 甲醇/醋酸固定10min。
5. 經固定的玻片空氣干燥，0.3％H2 O2 -甲醇30min滅活內源性氧化酶。
6. 5％正常兔血清封閉。
7. 甲酰胺100℃，5min變性核酸。
8. 冰浴冷卻后PBS洗滌，加1抗即抗小鼠BrdU單抗（工作濃度1：50），陰性對照加PBS或血清。
9. 按ABC法進行檢測，蘇木素或伊紅襯染，在顯微鏡下隨機計數10個高倍視野中細胞總數及BrdU陽性細胞數，計算標記指數（LI）。
客戶提供
1. 提供新鮮的肝素或者EDTA抗凝的外周血；
2. 提供新鮮的培養(yǎng)細胞，提供新鮮組織，需要實驗室制備成單細胞懸液。
 
我們提供
完整項目報告

收費標準/服務周期/提供結果：
詳談，我們會根據您的方案及需求制定詳細的服務協(xié)議。

【本公司合作項目】
慢病毒，腺病毒，RNAi類，分子生物實驗，病理實驗，免疫學實驗，細胞實驗，動物實驗，蛋白組學實驗等，能夠進行藥效學評價、毒理學評價、細胞藥篩、動物建模、病理檢測、蛋白組學、代謝組學、高通量測序、ChIP、CO-IP、生物信息學分析服務！

詳情請咨詢：

【公司】www.mxbio。。ｃｎ
【】
【技術咨詢】
【公司】shmxbio
【公司地址】上海市閔行區(qū)滄源路1200號2218室

Brdu細胞增殖檢測