Bradford蛋白定量試劑盒說明書

產(chǎn)品簡介：

Bradford Protein Assay Kit 檢測原理是在酸性乙醇溶液中考馬斯亮藍(lán)G250與蛋白結(jié)合顏色由棕色變?yōu)樗{(lán)色，在595nm有最大吸收值，檢測速度很快，少量樣品一般只需10min 即可完成檢測，檢測濃度下限達(dá)到25μg/ml，最小檢測蛋白量達(dá)到0.5μg，待測樣品體積為1～20μl，在50~1000μg/ml濃度范圍內(nèi)有較好的線性關(guān)系。該試劑盒僅用于科研領(lǐng)域，不宜用于臨床診斷或其他用途。

自備材料：

1、酶標(biāo)儀或分光光度計(jì)、96 孔板或比色杯、電子天平、研缽或勻漿器、離心機(jī)、離心管

2、蒸餾水、0.9%NaCl 或PBS

操作步驟(僅供參考)：

1、樣品蛋白質(zhì)的提取：稱取新鮮綠豆芽下胚軸(或小麥葉片)0.5~1.0g放入研缽中，加2mL蒸餾水研磨成勻漿，轉(zhuǎn)移到離心管中，再用6mL蒸餾水分次洗滌研缽，洗滌液收集于同離心管中，在室溫(20~25℃)下放置0.5~1h以充分提取，然后4000r/min 離心20min去沉淀，上清液轉(zhuǎn)入10mL容量瓶，以蒸餾水定容至刻度，即得待測樣品提取液。

2、取1ml蛋白標(biāo)準(zhǔn)配制液加入到含有 20mg的蛋白標(biāo)準(zhǔn)(BSA)中，充分溶解，后配制成20mg/ml的蛋白標(biāo)準(zhǔn)溶液，配制后可立即使用，配制的蛋白標(biāo)準(zhǔn)溶液應(yīng)-20℃保存。

3、取適量的20mg/ml蛋白標(biāo)準(zhǔn)，用蛋白標(biāo)準(zhǔn)稀釋液稀釋至終濃度為500μg/ml 或所需濃度，如取25μl 20mg/ml 蛋白標(biāo)準(zhǔn)，加入975μl蛋白標(biāo)準(zhǔn)稀釋液，充分混勻，即配制成500μg/ml 蛋白標(biāo)準(zhǔn)溶液。特別提示：待測蛋白溶解于什么樣的稀釋液中，蛋白標(biāo)準(zhǔn)也宜溶解于什么樣的稀釋液中，例如待測蛋白溶解于蔗糖中，亦取20mg/ml 蛋白標(biāo)準(zhǔn)溶解于蔗糖中；一般也可以用 0.9%NaCl或PBS作為溶解BSA稀釋液，稀釋后的500μg/ml蛋白標(biāo)準(zhǔn)溶液也應(yīng)-20℃長期保存。
4、將標(biāo)準(zhǔn)品按 0, 1, 2, 4, 8, 12, 16, 20μl 加到 96 孔板或EP管中，加蛋白標(biāo)準(zhǔn)稀釋液補(bǔ)足至20μl。
5、加適當(dāng)體積樣品到96孔板或EP管中，補(bǔ)蛋白標(biāo)準(zhǔn)稀釋液至20μl。
6、各孔加入200μl G250染色液，室溫放置3～5min。
7、酶標(biāo)儀或分光光度計(jì)測定595nm 波長處的吸光度，560~610nm之間的波長也可，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算出樣品中的蛋白濃度。
注意事項(xiàng)：
1、 G250染色液恢復(fù)至室溫充分混勻后使用，有利于提高檢測的靈敏度，加完G250染色液后，盡量在30min 內(nèi)完成吸光度的測定，防止沉淀形成后影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果。
2、 蛋白標(biāo)準(zhǔn)在全部溶解后先混勻，再稀釋成一系列不同濃度的蛋白標(biāo)準(zhǔn)。
3、 待測蛋白溶解于什么樣的稀釋液中，蛋白標(biāo)準(zhǔn)也應(yīng)溶解于什么樣的稀釋液中，否者待測蛋白與蛋白標(biāo)準(zhǔn)中所含非蛋白成分不一致，有可能導(dǎo)致測定不準(zhǔn)確。
4、 建議每次測定時(shí)都做標(biāo)準(zhǔn)曲線，因?yàn)闇y定時(shí)顏色會(huì)隨著時(shí)間的延長不斷加深，并且顯色反應(yīng)的速度和溫度有關(guān)，所以除非精確控制顯色反應(yīng)的時(shí)間和溫度，否則如需精確測定 應(yīng)每次都做標(biāo)準(zhǔn)曲線。
5、 沒有酶標(biāo)儀，也可使用分光光度計(jì)測定，但應(yīng)考慮比色杯的最小檢測體積，需按比例適當(dāng)加大G250染色液、樣品和標(biāo)準(zhǔn)品的用量使總體積不小于最小檢測體積，使用分光光度計(jì)測定蛋白濃度時(shí)，每個(gè)試劑盒可以測定的樣品數(shù)量可能會(huì)顯著減少。
6、 用比色杯測定蛋白含量時(shí)，由于考馬斯亮藍(lán)易結(jié)合石英比色杯，應(yīng)優(yōu)先選用一次性塑料比色杯，如用玻璃比色杯，比色完畢應(yīng)立即用乙醇清洗干凈。
7、 為了您的安全和健康，請穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。
8、 試劑開封后請盡快使用，以防影響后續(xù)實(shí)驗(yàn)效果。

有效期：12個(gè)月有效，蛋白標(biāo)準(zhǔn)配制成溶液后應(yīng)-20℃凍存。