氨基酸(AA)檢測(cè)試劑盒(茚三酮比色法)說(shuō)明書(shū)

產(chǎn)品簡(jiǎn)介：

氨基酸(AA)檢測(cè)試劑盒(茚三酮比色法)(Amino Acid Assay kit)檢測(cè)原理是在弱酸條件下，氨基酸與茚三酮共熱情況下能定量的產(chǎn)生藍(lán)紫色的二酮茚胺(又稱Ruhemans紫)，其吸收峰在波長(zhǎng)570nm處，在一定范圍內(nèi)顏色深淺(即吸光度)與氨基酸濃度成正比，該試劑盒主要用于檢測(cè)血清、尿液、植物組織、食品、藥品等中的總游離氨基酸含量。該試劑盒僅用于科研領(lǐng)域，不宜用于臨床診斷或其他用途。 

自備材料：

1、無(wú)氨蒸餾水或去離子水、60%乙醇

2、水浴鍋或恒溫箱、研缽或勻漿器

3、離心機(jī)、離心管或試管

4、比色杯、分光光度計(jì)

操作步驟(僅供參考)：

1、配制 AA Lysis buffer (1×)：取 1 份 AA Lysis buffer (5×)加 4 份去離子水混勻即成。

1、準(zhǔn)備樣品：

①植物樣品：取新鮮植物組織，清洗干凈，擦干，切碎，迅速稱取 0.4g，按植物組織：AA Lysis buffer(1×)=0.4g：2.0ml的比例加入AA Lysis buffer(1×)勻漿或研磨，用無(wú)氨蒸餾水稀釋至40ml，混勻，用濾紙過(guò)濾，濾液即為氨基酸粗提液，4℃保存?zhèn)溆谩?/span>

②血漿、血清和尿液樣品：血漿、血清按照常規(guī)方法制備后可以直接用于本試劑盒的測(cè)定，-20℃凍存，用于氨基酸的檢測(cè)。

③細(xì)胞或組織樣品：取恰當(dāng)細(xì)胞或組織裂解液，如有必要用AA Lysis buffer(1×)進(jìn)行勻漿，1000g離心5min，留取上清即為氨基酸粗提液，4℃保存，用于氨基酸檢測(cè)。

④高濃度樣品：如果樣品中含有較高濃度的氨基酸，可以使用AA Lysis buffer(1×)進(jìn)行恰當(dāng)?shù)南♂尅?/span>

2、配制茚三酮顯色液:取0.3g茚三酮，溶解于50ml茚三酮稀釋液，攪拌至溶解，即為茚三酮顯色液。4℃避光保存，30天有效。注意：茚三酮顯色液30天用不完，應(yīng)丟棄，重新配制?？煞Q取一定量的茚三酮再加稀釋液使終濃度為0.6%即可。

3、配制茚三酮工作液: 取適量的茚三酮顯色液、AA Assay buffer，按茚三酮顯色液：    AA Assay buffer=35：3的比例混合，即為茚三酮工作液，4℃避光密閉保存，2周有效。注意：AAAssay buffer所含物質(zhì)濃度較高，且有刺激性，如有結(jié)晶或沉淀，應(yīng)于40~70℃密閉溫育，使其溶解后使用。

4、配制維生素C工作液: 取出1支維生素C，準(zhǔn)確溶解于30ml無(wú)氨蒸餾水，混勻，4℃預(yù)冷備用，-20℃保存1周有效。該試劑盒提供的維生素C及其配制的工作液為過(guò)量。

注意事項(xiàng)：

1、實(shí)驗(yàn)材料應(yīng)盡量新鮮，如取材后不立即測(cè)定，應(yīng)存于4℃。

2、實(shí)驗(yàn)中用水盡量保證不被氨污染，否則會(huì)強(qiáng)烈干擾反應(yīng)。

3、如果樣品中含有大量蛋白質(zhì)或多肽也會(huì)影響結(jié)果的準(zhǔn)確性，應(yīng)先用蛋白沉淀劑去除而后檢測(cè)，一般常用乙酸、磺基水楊酸、三等作為沉淀劑。AA Lysis buffer有蛋白沉淀劑的功能。

4、氨基酸與茚三酮顯色反應(yīng)可用沸水浴15min，但易退色；在80℃水浴中孵育，并適當(dāng)延長(zhǎng)反應(yīng)時(shí)間，可增強(qiáng)顯色效果。產(chǎn)生的藍(lán)紫色產(chǎn)物在1h內(nèi)保持穩(wěn)定，建議盡快檢測(cè)。

5、脯氨酸或羥脯氨酸的檢測(cè)，建議使用脯氨酸(PRO)檢測(cè)試劑盒(茚三酮比色法)。

6、AA Lysis buffer(5×)和AA Assay buffer有腐蝕性和揮發(fā)性，應(yīng)小心操作，同時(shí)應(yīng)密閉保存，防止揮發(fā)。

7、空氣中的氧有可能干擾顯色反應(yīng)，盡量隔絕空氣。

8、加入維生素C可提高反應(yīng)的靈敏度，并使顏色穩(wěn)定，但加入過(guò)量，將導(dǎo)致吸光度人為偏大，應(yīng)嚴(yán)格掌握加入的量。

9、如果沒(méi)有分光光度計(jì)，也可以使用酶標(biāo)儀測(cè)定，但應(yīng)考慮酶標(biāo)儀的最大檢測(cè)體積。

10、所測(cè)樣品的濃度過(guò)高時(shí)，應(yīng)用AA Lysis buffer稀釋樣品后重新測(cè)定。

有效期：6個(gè)月有效。4℃運(yùn)輸，氨基酸標(biāo)準(zhǔn)收貨后應(yīng)-20℃保存。