細(xì)胞培養(yǎng)中常見(jiàn)的污染情況總結(jié)

細(xì)胞培養(yǎng)中常見(jiàn)的污染情況總結(jié)

對(duì)黑膠蟲(chóng)的各種猜測(cè)及相應(yīng)的處理
1. 非生物類(lèi)
（1）細(xì)胞碎片類(lèi)
在細(xì)胞培養(yǎng)的時(shí)候， 由于細(xì)胞代謝、物質(zhì)交換、周邊環(huán)境變化，尤其是在從37度培養(yǎng)箱中拿出來(lái)觀察的過(guò)程中，由于液體培養(yǎng)基的比熱較大，液內(nèi)溫度高于外界溫度，造成冷熱交換、小范圍內(nèi)形成液體流動(dòng)加劇，當(dāng)然這些小歲末就會(huì)被攪動(dòng)起來(lái)形成似乎"游動(dòng)"的感覺(jué)；隨著細(xì)胞培養(yǎng)的繼續(xù)，部分細(xì)胞開(kāi)始衰亡，細(xì)胞膜結(jié)構(gòu)破裂，破裂之后的細(xì)胞內(nèi)容物泄露到培養(yǎng)液中。尤其是溶酶體的破壞，連續(xù)性地造成其他細(xì)胞和細(xì)胞器的損傷，如果換液不很勤，又會(huì)出現(xiàn)進(jìn)一步破壞和殘?jiān)某霈F(xiàn)；再者，"黑焦蟲(chóng)"問(wèn)題是很多細(xì)胞培養(yǎng)者已經(jīng)發(fā)現(xiàn)的問(wèn)題，但到目前為止尚未找到其監(jiān)測(cè)和排除的試劑和手段，這首先是由于所謂"黑焦蟲(chóng)"病原體根本難以收集和捕捉， 這也從另一個(gè)側(cè)面證明了"黑焦蟲(chóng)"問(wèn)題的難以確定性；再說(shuō)任何一種外來(lái)的微生物在培養(yǎng)基中都會(huì)有生命活動(dòng)的反應(yīng)和表現(xiàn)，而不是簡(jiǎn)單地運(yùn)動(dòng)那樣的外觀性表現(xiàn)。舉一個(gè)例子：如果"黑焦蟲(chóng)"的運(yùn)動(dòng)狀況已經(jīng)到了用顯微鏡已經(jīng)可以觀察出的程度，其營(yíng)養(yǎng)代謝和能量需求也就可想而知。這樣，培養(yǎng)液中的影響消耗、酸堿含量程度等都要發(fā)生明顯變化。比如說(shuō)：迅速的、大含量的沉淀， pH值的迅速下降，細(xì)胞大量破碎死亡、引發(fā)其它類(lèi)型微生物侵染等等。而這些狀況，在所謂的"黑焦蟲(chóng)"感染中，是很難觀察到的。同時(shí)"黑焦蟲(chóng)"的出現(xiàn)而影響細(xì)胞狀態(tài)似乎得不到有力的證據(jù)。倒是細(xì)胞狀態(tài)下降的時(shí)候，"黑焦蟲(chóng)"明顯增多了。很有可能是細(xì)胞狀態(tài)下降時(shí)，細(xì)胞衰亡產(chǎn)生的細(xì)胞碎片。所以黑膠蟲(chóng)屬于細(xì)胞碎片是比較可能和合理的。
（2）玻璃培養(yǎng)瓶中的類(lèi)似氧化硅的東西
網(wǎng)上有一篇文章說(shuō)，黑膠蟲(chóng)其實(shí)不是一種生物，是無(wú)機(jī)物，其本質(zhì)是玻璃培養(yǎng)瓶里的硅顆粒?？捎绊懠?xì)胞生長(zhǎng)，細(xì)胞狀態(tài)好時(shí)，不明顯。細(xì)胞狀態(tài)較差，數(shù)量少時(shí)才容易看到，的辦法是用一次性培養(yǎng)瓶，可消除黑膠蟲(chóng)影響。
（3）血清聚合物產(chǎn)物
gibco公司的血清說(shuō)明，此物為血清聚合產(chǎn)物，而不是微生物。
2. 生物類(lèi)
（1）支原體
有人曾認(rèn)為黑膠可能是支原體污染，因?yàn)橄鄬?duì)比較的文章指出，黑膠蟲(chóng)可以通過(guò)濾膜，可以在空氣中傳播。而恰巧口腔支原體為人體口腔中之正常菌叢，所以實(shí)驗(yàn)室之操作人員的污染亦可能為支原體的污染源。但有人為此做了實(shí)驗(yàn)證明黑膠蟲(chóng)不會(huì)是支原體，原因如下：
光鏡下可見(jiàn), 因?yàn)轶w積不對(duì)，支原體在普通顯微鏡下不能看到。
多種染色后可見(jiàn)，甚至hoechst即能將它染色,一般來(lái)說(shuō)支原體用普通染色法不易著色，用姬姆薩染色很淺，革蘭染色為陰性。所以，黑膠蟲(chóng)是一種支原體的可能性比較小。
（2）真菌
有很多人發(fā)現(xiàn)類(lèi)似黑膠蟲(chóng)的，但zui后確定是真菌，二性霉素B對(duì)其有效。那說(shuō)明黑膠蟲(chóng)不存在只是細(xì)胞培養(yǎng)中的真菌感染，還是說(shuō)明黑膠蟲(chóng)污染屬于真菌類(lèi)污染物。如果黑膠蟲(chóng)是一種真菌，那么由此引起的污染是不會(huì)引起那么多人的關(guān)注，即使它很特殊。但是這不能排除那些認(rèn)為"黑膠蟲(chóng)"是真菌的細(xì)胞者，看到的只是一般真菌感染。由于細(xì)胞被感染了，要進(jìn)行拯救處理，不像理論上那么簡(jiǎn)單，稍有不注意都是很容易導(dǎo)致培養(yǎng)失敗，所以黑膠蟲(chóng)是一種真菌也是不太可能。
（3）寄生類(lèi)原蟲(chóng)
黑膠蟲(chóng)屬于寄生類(lèi)的原蟲(chóng)，而不是細(xì)菌、支原體，也不是什么補(bǔ)體、細(xì)胞碎片或蛋白沉淀。有人在400倍以上的高倍鏡下可以清楚的看到膠蟲(chóng)有兩種不同形態(tài)，一種較大，運(yùn)動(dòng)較慢，泛紅光；另一種較小，運(yùn)動(dòng)較快，紅中帶綠，個(gè)小的圍著個(gè)大的分布，很可能是公的圍著雌的。這種生物也并非離開(kāi)細(xì)胞就不能存活，也有人做過(guò)這樣的試驗(yàn)，單純培養(yǎng)過(guò)污染膠蟲(chóng)的血清4周，直到滿(mǎn)視野都是黑煤渣般的膠蟲(chóng)。給人的感覺(jué)是膠蟲(chóng)和細(xì)胞一樣有叢集性，如果膠蟲(chóng)密度低則生長(zhǎng)緩慢，如果手懶，拖了幾天沒(méi)換液，待膠蟲(chóng)生長(zhǎng)到一定濃度后便會(huì)飛速分生，細(xì)胞受感染的程度也大，這時(shí)除了培養(yǎng)基中可見(jiàn)外，細(xì)胞表面通常也象長(zhǎng)滿(mǎn)了粉刺，所以有人認(rèn)為細(xì)胞旁分泌的某些因子可以抑制膠蟲(chóng)的生長(zhǎng)。據(jù)說(shuō)，中國(guó)病毒所和軍科院鑒定是一種寄生于牛血清內(nèi)的一種原蟲(chóng)，似乎和草履蟲(chóng)和變形蟲(chóng)有類(lèi)似之處，然而由于課題經(jīng)費(fèi)不夠而不能繼續(xù)進(jìn)行下去。由此黑膠蟲(chóng)屬于原蟲(chóng)的有比較大的可能性。