ELISA試劑盒特別的包被方式

ELISA試劑盒特別的包被方式
ELISA試劑盒這以后經(jīng)過抗原抗體反響使抗原固相化。此直接在固相上的抗原遠離載體外表，其抗原決定簇也得以充分露出。直接包被的抗原經(jīng)固相抗體的親和層析效果，人elisa試劑盒包被在固相上的抗原純度大大提高，因而含雜質(zhì)較多的抗原也可采用捕獲包被法,實驗的特異性、敏感性均由此得以改進，重復性亦佳。直接包被 的另一長處是抗原用量少，僅為直接包被的1/10乃至于/100。不易吸附在聚苯乙烯載體上的非蛋白質(zhì)抗原可采用。例如，在檢查抗DNA抗體時，需用 DNA作為包被抗原，而遍及的固相載體通常不能直接與核酸。
辦法二 用于檢查不知道抗體的直接法： 用包被緩沖液將已知抗原稀釋至1～10μg／ml， 每孔加0.1ml，4℃一夜。次日洗刷3次。
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ELISA試劑盒加必定稀釋的待檢樣品（不知道抗體）0.1ml于上述已包被的反響孔
中,置37℃孵育1小時,洗刷。（一起做空白、陰性及陽性孔對照）
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于反響孔中，加入新鮮稀釋的酶標第二抗體（抗抗體）0.1ml，
37℃孵育30-60分鐘，洗刷,zui終一遍用DDW洗刷。
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其他步驟同“雙抗體夾心法"的4、5、6。
ELISA試劑盒將抗原或抗體固定在進程稱為包被。換言之，包被便是抗原或抗體到固相載體外表的進程。蛋白質(zhì)與聚苯乙烯固相載體是經(jīng)過物理吸附的，靠的是蛋白質(zhì)分子 構(gòu)造上的疏水基團與固相載體外表的疏水基團間的效果。這種物理吸附對錯特異性的，受蛋白質(zhì)的分子量、等電點、人ELISA試劑盒濃度等的影響。載體對不一樣 蛋白質(zhì)的吸附才能是不相同的，大分子蛋白質(zhì)較小分子蛋白質(zhì)通常富含更多的疏水基團，因而更易吸附到固相載體外表。IgG對聚苯乙烯等固相具有較強的吸附 力，其聯(lián)合多發(fā)生在Fc段上，抗體點露出于外，因而抗體的包被通常均采用直接吸附法。