EDTA抗原修復(fù)液有人用過(guò)嗎？

EDTA抗原修復(fù)液有人用過(guò)嗎？

抗原修復(fù)是利用化學(xué)試劑和熱的作用將封閉的抗原或肽鏈發(fā)生扭曲的抗原重新暴露出來(lái)或修正過(guò)來(lái)的過(guò)程。EDTA抗原修復(fù)液是一種常用的抗原修復(fù)液，可以用于石蠟切片、冰凍切片等樣品使用多聚甲醛、甲醛或其它醛類試劑固定后的抗原修復(fù)。可以有效去除醛類固定試劑導(dǎo)致的蛋白之間的交聯(lián)，充分暴露石蠟切片等樣品中的抗原表位，從而大大改善免疫染色效果。
在免疫組化染色后，出現(xiàn)假陰性、時(shí)隱時(shí)現(xiàn)等現(xiàn)象的基本原因：
1.組織在用甲醛固定的過(guò)程中所形成的醛鍵可封閉抗原的決定族。甲醛與組織蛋白質(zhì)類的反應(yīng)是多樣而復(fù)雜的，因?yàn)樗芎投喾N不同的功能基團(tuán)結(jié)合，在多數(shù)情況下在其間形成橋鍵8。這也是甲醛的一個(gè)作用，因?yàn)樗且环N聚合固定劑，因而能在相鄰的蛋白質(zhì)鍵間形成橋鍵的作用。
2. 甲醛在保存進(jìn)程中會(huì)形成羥甲基，也可封閉抗原決定族。據(jù)French和Edsall的研究認(rèn)為，zui常遇到的甲醇反應(yīng)，就是加到一個(gè)含反應(yīng)性氫原子的化合物中，形成一個(gè)羥甲基化合物。
3.在組織固定過(guò)程中，甲醛與蛋白質(zhì)發(fā)生交聯(lián)，形成醛交聯(lián)蛋白，這種化合物封閉了抗原，使之無(wú)法表達(dá)出來(lái)。
抗原修復(fù)的集中方法
1. 真空負(fù)壓抗原修復(fù)法：
① 切片脫蠟至水。
②0.3%H2O2甲醇真空負(fù)壓處理5分鐘。
③自來(lái)水洗，蒸餾水洗。
④0.01M檸檬酸鹽緩沖液（PH6.0），真空負(fù)壓干燥箱預(yù)先調(diào)至95℃，真空負(fù)壓處理10分鐘。
⑤待修復(fù)注降至室溫的一，PBS洗3次，隨后按選好的免免疫組化染色方法進(jìn)行染色。
2.微波輻射抗原修復(fù)法：
①切片脫蠟至水。
②0.3%H2O2甲醇處理10分鐘。
③自來(lái)水洗，蒸餾水洗。
④ 0.01M檸檬酸鹽緩沖液（PH6.0），于微波爐內(nèi)微波輻射10分鐘，如檢測(cè)Er和Pr則需要20輻射分鐘左右。
⑤待修復(fù)液降至室溫后，PBS洗3次，隨后按選好的免疫組化學(xué)的染色方法進(jìn)行染色。
3.高壓抗原修復(fù)法：
①切片脫蠟至水。
②0.3%H2O2甲醇處理切片10分鐘。
③自來(lái)水洗，蒸餾水洗。
④切片放入抗原修復(fù)液中，邊同容器放入高壓鍋中加熱至沸騰。蓋上壓力閥至噴汽后持續(xù)1－4分鐘。
⑤待修復(fù)液恢復(fù)至室溫后，PBS洗3次，隨后按選好的免疫組織化學(xué)染色方法進(jìn)行染色。
4.隔水熱抗原修復(fù)法：
①切片脫蠟至水。
②0.3%H2O2甲醇處理切片10分鐘。
③自來(lái)水洗，蒸餾水洗。
④切片放入0.01M檸檬酸鹽緩沖液（PH6.0）中，邊同容器一起放入水溶鍋中加熱，其間應(yīng)不斷用溫度計(jì)測(cè)其溫度，待抗原修復(fù)液的溫度達(dá)到有效溫度后（92℃↑）。即開始計(jì)時(shí)，持續(xù)40分鐘。
⑤待抗原修復(fù)液恢復(fù)至室溫后，PBS洗3次，隨后按選定好的免疫組化染色方法進(jìn)行染色。
5.電爐加熱抗原修復(fù)法：
①切片脫蠟至水。
②0.3%H2O2甲醇處理切片10分鐘。
③自來(lái)水洗，蒸餾水洗。
④ 將切片放入抗原修復(fù)液中于電爐上加熱，不時(shí)用溫度計(jì)測(cè)量溫度，當(dāng)達(dá)92℃后，即可拔離電源，當(dāng)溫度低于92℃時(shí)，再插上電源，如此反復(fù)持續(xù)至10分鐘左右。
⑤待抗原修復(fù)液降至室溫后，PBS洗3次，隨后按選定的免疫組化染色方法進(jìn)行染色。