生物素衍生物的標(biāo)記及其產(chǎn)物的檢測原理

生物素衍生物的標(biāo)記及其產(chǎn)物的檢測原理

一、生物素簡介

生物素（biotin，B）分子量244．31D．生物素分子有兩個(gè)環(huán)狀結(jié)構(gòu)，其中Ⅰ環(huán)為咪唑酮環(huán)，是與親和素結(jié)合的主要部位；Ⅱ環(huán)為噻吩環(huán)，C2上有一戊酸側(cè)鏈，其末端羧基是結(jié)合抗體和其他生物大分子的*結(jié)構(gòu)，經(jīng)化學(xué)修飾后，生物素可成為帶有多種活性基團(tuán)的衍生物——活化生物素。

二、生物素衍生物簡介

1、常見的標(biāo)記方法

★對抗原、抗體標(biāo)記后活性不變；可對標(biāo)記材料（如酶）標(biāo)記，但堿性磷酸酶標(biāo)記后活性將降低。

2、常見的生物素衍生物結(jié)構(gòu)及其性質(zhì)

三、生物素標(biāo)記產(chǎn)物的檢測

1、檢測原理：

親和素（avidin，AV）亦稱抗生物素蛋白、卵白素，是從卵白蛋白中提取的一種由4個(gè)相同亞基組成的堿性糖蛋白，分子量為68kD，等電點(diǎn)pI=10.5；耐熱井耐受多種蛋白水解酶的作用．尤其是與生物素結(jié)合后，穩(wěn)定性更好。每個(gè)親和素能結(jié)合4個(gè)分子的生物素，二者之間的親和力*，親和素常數(shù)（K）為10^15 l/mol，比抗原與抗體間的親和力（K＝10^5～10^11 L/mol）至少高1萬倍，二者的結(jié)合特異性高和穩(wěn)定性好。因此，可以用標(biāo)記HRP或熒光素的親和素或鏈霉親和素去檢測生物素的標(biāo)記產(chǎn)物。

2、檢測方法舉例：

1）熒光標(biāo)記的親和素進(jìn)行熒光檢測

2）標(biāo)記親和素-生物素ELISA檢測法（LBA法）

3）橋接親和素-生物素ELISA檢測法（BAB法）

4）親和素-生物素-過氧化物酶復(fù)合物ELISA檢測法（ABC法）

5）標(biāo)記鏈霉親和素-生物素ELISA檢測法（LSAB法）