柱式病毒RNAOUT使用手冊(cè)

產(chǎn)品及特點(diǎn)

本產(chǎn)品是在天澤基因一管式病毒RNAOUT的基礎(chǔ)上開(kāi)發(fā)的、專(zhuān)門(mén)用于從血清(血漿)等液體樣品中提取微量病毒RNA的產(chǎn)品，它具有下列特點(diǎn)：

• 操作簡(jiǎn)單，整個(gè)過(guò)程只需要20分鐘左右，不需要額外在洗柱液中補(bǔ)加乙醇。
• 靈敏度高，通過(guò)RT-PCR檢測(cè)到的zui終靈敏度可以達(dá)到50拷貝/mL。
• 安全無(wú)毒，不需要使用苯酚和氯等有機(jī)溶液。
• 如果加上病毒離心富集步驟，zui多可以處理1.5 mL液體病毒樣品。
• 與RT-PCR和熒光RT-PCR兼容。
• 價(jià)廉物美，性?xún)r(jià)比遠(yuǎn)低于國(guó)外同類(lèi)產(chǎn)品。
• 適用于各種材料，包括血清、血漿、腦脊液、尿液、糞便、培養(yǎng)細(xì)胞上清液等無(wú)細(xì)胞材料。

規(guī)格及成分

運(yùn)輸及保存

常溫運(yùn)輸，4℃保存，有效期一年。

自備試劑

無(wú)

使用方法

• 在1.5 mL離心管中加入0.1-0.2 mL液體病毒樣品。如果病毒需要富集，可以將1.5 mL液體在4℃下24，000 g冷凍離心60分鐘，移棄1.3 mL后繼續(xù)操作。
• 加入0.6 mL溶液A，振蕩30秒混勻后室溫放置10分鐘。注意：溶液 A 在 4℃放置后可能會(huì)產(chǎn)生沉淀，使用前必須放在 65℃水浴使沉淀*溶解并充分搖勻后再取用。
• 將溶液全部轉(zhuǎn)移到離心吸附柱中，室溫放置2分鐘。
• 12，000-15，000 g室溫離心1分鐘，棄收集管中穿透液。
• 加入0.8 mL通用洗柱液到離心吸附柱中，12，000-15，000 g室溫離心1分鐘，棄收集管中穿透液。
• 12，000-15，000 g室溫離心半分鐘。
• 在離心吸附柱的濾膜的中部加入30-100 uL通用洗脫液，然后將離心吸附柱套入一新的1.5 mL離心管中，室溫放置2分鐘。
• 12，000-15，000 g室溫離心1分鐘，離心管中收集的樣品即為RNA。
• RNA樣品可以直接用于RT-PCR或逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)，也可放-80℃長(zhǎng)期保存。

相關(guān)資料

常見(jiàn)人類(lèi)疾病相關(guān)RNA病毒

疑難解答

Q：提取液體樣品/病毒核酸(RNA或DNA)為何很難？

A：原因一是量少。病毒顆粒中的RNA或DNA是作為遺傳物質(zhì)保存，每個(gè)病毒zui多只攜帶幾個(gè)拷貝(而一個(gè)細(xì)胞中有上萬(wàn)種RNA分子，每種RNA有很多拷貝)，同時(shí)其長(zhǎng)度也十分有限(一般不到細(xì)胞基因組的萬(wàn)分之一)，樣品中病毒數(shù)往往又不是很多，使得樣品中病毒核酸的量往往比一個(gè)細(xì)胞中核酸的量還少，所以操作中十分容易丟失。另外，由于得到的核酸量很少，不能使用電泳和測(cè)OD檢測(cè)，只能通過(guò)PCR或RT-PCR檢測(cè)，而PCR或RT-PCR的條件又需要優(yōu)化，所以要確定提取是否成功十分不容易。

關(guān)聯(lián)產(chǎn)品

柱式病毒DNAOUT（CAT#:70701-50）