柱式病毒RNAOUT使用手冊

產品及特點

本產品是在天澤基因一管式病毒RNAOUT的基礎上開發(fā)的、專門用于從血清(血漿)等液體樣品中提取微量病毒RNA的產品，它具有下列特點：

• 操作簡單，整個過程只需要20分鐘左右，不需要額外在洗柱液中補加乙醇。
• 靈敏度高，通過RT-PCR檢測到的zui終靈敏度可以達到50拷貝/mL。
• 安全無毒，不需要使用苯酚和氯等有機溶液。
• 如果加上病毒離心富集步驟，zui多可以處理1.5 mL液體病毒樣品。
• 與RT-PCR和熒光RT-PCR兼容。
• 價廉物美，性價比遠低于國外同類產品。
• 適用于各種材料，包括血清、血漿、腦脊液、尿液、糞便、培養(yǎng)細胞上清液等無細胞材料。

規(guī)格及成分

運輸及保存

常溫運輸，4℃保存，有效期一年。

自備試劑

無

使用方法

• 在1.5 mL離心管中加入0.1-0.2 mL液體病毒樣品。如果病毒需要富集，可以將1.5 mL液體在4℃下24，000 g冷凍離心60分鐘，移棄1.3 mL后繼續(xù)操作。
• 加入0.6 mL溶液A，振蕩30秒混勻后室溫放置10分鐘。注意：溶液 A 在 4℃放置后可能會產生沉淀，使用前必須放在 65℃水浴使沉淀*溶解并充分搖勻后再取用。
• 將溶液全部轉移到離心吸附柱中，室溫放置2分鐘。
• 12，000-15，000 g室溫離心1分鐘，棄收集管中穿透液。
• 加入0.8 mL通用洗柱液到離心吸附柱中，12，000-15，000 g室溫離心1分鐘，棄收集管中穿透液。
• 12，000-15，000 g室溫離心半分鐘。
• 在離心吸附柱的濾膜的中部加入30-100 uL通用洗脫液，然后將離心吸附柱套入一新的1.5 mL離心管中，室溫放置2分鐘。
• 12，000-15，000 g室溫離心1分鐘，離心管中收集的樣品即為RNA。
• RNA樣品可以直接用于RT-PCR或逆轉錄反應，也可放-80℃長期保存。

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疑難解答

Q：提取液體樣品/病毒核酸(RNA或DNA)為何很難？

A：原因一是量少。病毒顆粒中的RNA或DNA是作為遺傳物質保存，每個病毒zui多只攜帶幾個拷貝(而一個細胞中有上萬種RNA分子，每種RNA有很多拷貝)，同時其長度也十分有限(一般不到細胞基因組的萬分之一)，樣品中病毒數(shù)往往又不是很多，使得樣品中病毒核酸的量往往比一個細胞中核酸的量還少，所以操作中十分容易丟失。另外，由于得到的核酸量很少，不能使用電泳和測OD檢測，只能通過PCR或RT-PCR檢測，而PCR或RT-PCR的條件又需要優(yōu)化，所以要確定提取是否成功十分不容易。

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