乙酸激酶檢測(cè)試劑盒使用詳情！

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產(chǎn)品說(shuō)明：

ACK 廣泛存在于生物體內(nèi)，催化乙酸和 ATP 生成乙酰磷酸和 ADP，是細(xì)菌碳代謝和能量代謝的關(guān)鍵酶，尤其 在古細(xì)菌甲烷合成代謝中起著中樞作用。

測(cè)定原理如下：（1）ACK 催化乙酸鈉和 ATP 生成乙酰磷酸和 ADP，（2）丙酮酸激酶催化 ADP 和 PEP 生成 ATP和丙酮酸，（3）乳酸脫氫酶催化丙酮酸和 NADH 生成乳酸和 NAD+，（4）在 340nm 下測(cè)定 NADH 氧化生成 NAD+速率，即可反映 ACK 活性。

試驗(yàn)中所需的儀器和試劑：

臺(tái)式離心機(jī)、紫外分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、水浴鍋、微量石英比色皿/ 96 孔 UV 板、可調(diào)式移液槍、研缽/勻漿器、 冰、蒸餾水。

操作步驟：

一、樣品處理：

1、細(xì)菌或細(xì)胞處理：

收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi)，離心后棄上清；按照每 500 萬(wàn)細(xì)菌或細(xì)胞加入 1mL 提取液，超聲波破碎細(xì)菌或 胞（功率 20％，超聲 3 秒，間隔 10 秒，重復(fù) 30 次），15000g，4℃，離心 20 分鐘，取上清，置冰上待測(cè)。

2、組織處理：

稱取約 0.1g 組織，加入 1mL 提取液進(jìn)行冰浴勻漿；15000g ，4℃，離心 20 分鐘，取上清，置冰上待測(cè)。

3、血清（漿）：直接檢測(cè)。

二、測(cè)定步驟：

1、 紫外分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀預(yù)熱 30min 以上，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至 340nm，蒸餾水調(diào)零。2、 將試劑一于 37℃（哺乳動(dòng)物）或 25℃（其它物種）保溫 15min。

注意事項(xiàng)：

1、測(cè)定過(guò)程中樣本和所有試劑在冰上放置，以免變性和失活。

2、反應(yīng)液的溫度必須保持 37℃或 25℃，比色皿測(cè)定時(shí)可取小燒杯一只裝入一定量的 37℃或 25℃蒸餾水，將此燒放入 37℃或 25℃水浴鍋中。在反應(yīng)過(guò)程中把比色皿連同反應(yīng)液放在此燒杯中。

3、吸光值大于 1 時(shí)，建議稀釋后測(cè)量，注意計(jì)算公式乘以稀釋倍數(shù)；吸光值小于 0.01 時(shí)，建議延長(zhǎng)反應(yīng)時(shí)間測(cè)量，注意計(jì)算公式變化。

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