植物中脂氧合酶測定原理！

植物中脂氧合酶測定原理！

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測定意義：

LOX廣泛存在于植物組織中，催化不飽和脂肪酸氧化反應(yīng)，導(dǎo)致膜脂過氧化。在植物的生長發(fā)育、成熟衰老及逆境脅迫過程中具有重要作用。

測定原理：

LOX催化亞油酸氧化，氧化產(chǎn)物在234nm處有特征吸收峰；測定234nm吸光度增加速率，來計算LOX活性。

自備儀器和用品：

研缽、冰、臺式離心機(jī)、紫外分光光度計/酶標(biāo)儀、微量石英比色皿/96孔板、可調(diào)式移液槍和蒸餾水。

試劑組成和配制：

試劑一：液體×1瓶，4℃保存。

試劑二：液體×1瓶，4℃保存。

試劑三：粉劑×1瓶，4℃保存。臨用前加入2mL試劑二，充分溶解。

粗酶液提?。?/span>

稱取約0.1g樣品，加試劑一1mL，冰上充分研磨，16000g 4℃離心20min，取上清液待測。

測定：

1. 分光光度計預(yù)熱30 min以上，調(diào)節(jié)波長到234 nm，蒸餾水調(diào)零。

2. 試劑二在25℃水浴中預(yù)熱30 min以上。

3. 空白管：依次在微量石英比色皿/96孔板中加入20μL蒸餾水、160μL試劑二和20μL試劑三，迅速混勻后于234nm比色，記錄15s和75s的吸光值，分別記為A1和A2。

4. 測定管：依次在微量石英比色皿/96孔板中加入20μL上清液、160μL試劑二和20μL試劑三，迅速混勻后于234nm比色，記錄15s和75s的吸光值，分別記為A3和A4。

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