產(chǎn)品名稱:甲基檸檬酸合酶(MCS)可見分光光度法測(cè)試盒
規(guī)格 : 50管/48樣
測(cè)試方法: 可見分光光度法
貨號(hào):GOY-01S6587
分類:三羧酸循環(huán)系列
商品介紹:
MCS廣泛存在于動(dòng)物、植物、微生物和培養(yǎng)細(xì)胞的線粒體基質(zhì)中,與檸檬酸合酶(CS)共同參與三羧酸循環(huán)的調(diào)節(jié)。
測(cè)定原理:
MCS催化丙酰CoA和草酰乙酸產(chǎn)生甲基檸檬酰,進(jìn)一步水解產(chǎn)生甲基檸檬酸;該反應(yīng)促使無(wú)色的DTNB轉(zhuǎn)變成黃色的TNB,在 412nm處有特征吸光值。
需自備的儀器和用品:
可見分光光度計(jì)、臺(tái)式離心機(jī)、水浴鍋、可調(diào)式移液器、1mL玻璃比色皿、研缽、冰、無(wú)水乙醇和蒸餾水
試劑的組成和配制
提取液一:液體50mL×1瓶,4℃保存。
提取液二:液體50mL×1瓶,4℃保存。
試劑一:粉劑×1瓶,-20℃保存;臨用前加入40mL試劑四充分溶解待用,用不完的試劑4℃保存;
試劑二:液體18μL×1瓶,4℃保存;臨用前加入2.5mL蒸餾水充分溶解待用,用不完的試劑4℃保存;
試劑三:粉劑×1瓶,-20℃保存;臨用前加入2.5mL蒸餾水充分溶解待用,用不完的試劑4℃保存;
試劑四:液體50mL×1瓶, 4℃保存;
測(cè)定步驟
1、 分光光度計(jì)預(yù)熱30min以上,調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至340nm,蒸餾水調(diào)零。
2、 將試劑一、二、三37℃(哺乳動(dòng)物)或25℃(其它物種)預(yù)熱10分鐘。
3、 加樣表:
![圖2.jpg 圖2.jpg](https://img73.chem17.com/6fd5d5abffebbb9ee0327440cf20a8da16673b608148826cf3e0d36e1a4bd8f052dcff23e0c013fb.jpg)
樣本的前處理
①總FBP酶提?。航ㄗh稱取約0.1g樣本,加入1mL提取液一,冰浴勻漿后超聲破碎(冰浴,200W,破碎3s,間歇7s,總時(shí)間1min),然后4℃,8000g離心10min,取上清測(cè)定。
②胞漿和葉綠體FBP酶的分離:按照植物組織質(zhì)量(g):提取液體積(mL)為1:5~10的比例(建議稱取約0.1g樣本,加入1mL提取液一),冰浴勻漿后于4℃,200g離心5min,棄沉淀,取上清在4℃,8000g離心10min,取上清用于測(cè)定胞漿FBP酶活性,取沉淀加1mL提取液二,震蕩溶解后超聲破碎(冰浴,200W,破碎3s,間歇7s,總時(shí)間1min),然后4℃,8000g離心10min,取上清測(cè)定葉綠體中FBP酶活性。
建議測(cè)定總FBP酶活性,按照步驟①提取粗酶液,若需要分別測(cè)定胞漿和葉綠體中的FBP,則按照步驟②提取粗酶液。
FBP活性計(jì)算:
(1)按樣本蛋白濃度計(jì)算
單位的定義:每mg組織蛋白每分鐘生成1 nmol的NADPH定義為一個(gè)酶活力單位。
FBP(nmol/min/mg prot)=[ΔA×V反總÷(ε×d)×109]÷(V樣×Cpr) ÷T=321.5×ΔA÷Cpr
(2)按樣本鮮重計(jì)算
單位的定義:每g組織每分鐘生成1 nmol的NADPH定義為一個(gè)酶活力單位。
FBP(nmol/min/g 鮮重)=[ΔA×V反總÷(ε×d)×109]÷(W ×V樣÷V樣總) ÷T=321.5×ΔA÷W
V反總:反應(yīng)體系總體積,1×10-3 L;ε:NADPH摩爾消光系數(shù),6.22×103 L / mol /cm;d:比色皿光徑,1cm;V樣:加入樣本體積,0.1 mL;V樣總:加入提取液體積,1mL;T:反應(yīng)時(shí)間,5 min;Cpr:樣本蛋白質(zhì)濃度,mg/mL;W:樣本質(zhì)量,g。
EB病毒LMP-2A蛋白抗體 納曲酮抗體IgG
內(nèi)皮細(xì)胞活化蛋白受體抗體 墨蝶蛉還原酶抗體
效應(yīng)細(xì)胞蛋白酶受體1抗體 末端脫氧核苷酸轉(zhuǎn)移酶抗體
FBXO36 F-box蛋白相關(guān)蛋白36抗體 末端多聚腺苷酸2蛋白抗體
表皮生長(zhǎng)因子樣蛋白8抗體 末端多聚腺苷酸1蛋白抗體
雞分泌型免疫球蛋白A(SIgA)elisa分析檢測(cè)試劑盒
雞鈣結(jié)合蛋白(CALB2)elisa分析檢測(cè)試劑盒
雞甘丙肽(GAL)elisa分析檢測(cè)試劑盒
雞甘油醛-3-磷酸脫氫酶(GAPDH)elisa分析檢測(cè)試劑盒
雞睪酮(T)elisa分析檢測(cè)試劑盒
甲基檸檬酸合酶(MCS)可見分光光度法測(cè)試盒多頭被孢 亞膜漢遜酵母
云芝 大腸埃希菌凍干粉
細(xì)黃鏈霉菌 棒桿菌
肺炎克雷伯菌凍干粉 嗜肺軍團(tuán)菌
費(fèi)氏志賀氏菌 溫特曲霉
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