摘 要：

凍干的細菌可以保存很長時間，通常情況下復蘇不會有太大問題。但是對一些比較珍貴、比較難以獲取的菌種，在復蘇時也要注意，嚴格按照步驟進行操作。主要步驟包括查詢了解凍干菌種的相關信息、準備相關培養(yǎng)基（包括液體培養(yǎng)基和平板）和培養(yǎng)條件、溶解、接種、培養(yǎng)等。

關鍵詞： 凍干 , 菌種保藏

菌種是從事微生物學及生命科學研究的基本材料，其重要性不言而喻，因此在復蘇一些凍干保藏的菌種時應先了解一些相關知識。凍干的細菌可以保存很長時間，通常情況下復蘇不會有太大問題，我曾經復蘇了一支30多年前凍干保存的菌株。但是對一些比較珍貴、比較難以獲取的菌種，在復蘇時也要注意，嚴格按照步驟進行操作。

每種菌的復蘇方法可能會不太一樣，尤其是對于一些難以培養(yǎng)的細菌復蘇會困難一些，下面是一個通用的凍干保藏菌種的復蘇方法。

1、查詢了解凍干菌種的相關信息，如菌株名稱、zui適培養(yǎng)基、zui適培養(yǎng)條件、是否有致病性等。如果從ATCC等菌株保藏單位購買的菌株，一般能會都會提供這些信息。如果是個人保存的菌種，與保存人獲取信息。如果實在沒有，只能從文獻和網絡是查找了。

2、準備相關培養(yǎng)基（包括液體培養(yǎng)基和平板）和培養(yǎng)條件，并準備70%酒精棉、接種環(huán)、攝子、酒精燈等試劑和器材，將這些試劑和器材移入接種室或凈化臺。

3、觀察凍干瓶上是否有標記，如有標記，剛詳細記錄，其中可能包括有菌株編號、凍干日期等信息。

4、用70%酒精棉對凍干瓶表面進行消毒，待干后，打開凍干瓶。

5、用移液器吸取適量（通常約為300-500μl）的無菌生理鹽水或培養(yǎng)液溶解凍干菌塊。

6、用接種環(huán)挑取溶解后的菌液，在平板培養(yǎng)基上劃線，并挑取菌液接種到液體培養(yǎng)基（需要多劃幾個平板，多接內管菌。我通常是做3-5個）。

7、如果菌種凍存時間太久遠，存活細菌太少?？梢匀∩倭烤海ㄈ?00μl）用培養(yǎng)基10倍梯度稀釋后，每個梯度取100μl涂平板并接種液體培養(yǎng)基。

8、標記并做好記錄，將接種后的平板和液體培養(yǎng)基在適宜的條件下進行培養(yǎng)。