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產(chǎn)品名稱：EZ®小鼠組織DNA直擴(kuò)PCR試劑盒
英文名稱：EZ Mouse DNA Direct PCR Kit
產(chǎn)品規(guī)格：50T/200T
產(chǎn)品價(jià)格：420/1350元
試劑盒應(yīng)用：轉(zhuǎn)基因小鼠、基因缺失小鼠鑒定。
試劑盒組成：MuDNA-EZ-1、MuDNA-EZ-2、MuDNA-EZ-3、2×TaqMix、H2O
保存條件：-20oC保存。使用前將MuDNA-EZ-1、MuDNA-EZ-3在室溫或37oC充分溶解。MuDNA-EZ-2、2×TaqMix使用時(shí)需置于冰上。
使用方法：
（1）將MuDNA-EZ-1和MuDNA-EZ-2以25：1的比例混合均勻，并分裝每管26µL。
（2）剪取小鼠尾巴1-3毫米，*浸入上述溶液中。
（3）置于50oC加熱30分鐘。
（4）置于95oC加熱10分鐘。
（5）加入50µL MuDNA-EZ-3。
（4）取上述處理液進(jìn)行PCR擴(kuò)增。
推薦的PCR加樣體系
成分 | 總20 μL體系 |
2×TaqMix | 10 μL |
上游引物（10 μM） | 1 μL |
下游引物（10 μM） | 1 μL |
模板DNA | 2 μL |
H2O | 6 μL |
PCR反應(yīng)條件
步驟 | 溫度 | 時(shí)間 | 循環(huán)數(shù) |
預(yù)變性 | 94 oC | 5 min | |
變性 | 94 oC | 30 s | 30-35 |
退火 | 50~72 oC | 30 s | |
延伸 | 72 oC | 1 kb/min | |
終延伸 | 72 oC | 10 min | |
4 oC | Hold |
EZ®小鼠組織DNA直擴(kuò)PCR試劑盒注意事項(xiàng)
（1）剪取不同小鼠尾巴時(shí)，應(yīng)當(dāng)更換剪刀，用過(guò)的剪刀經(jīng)過(guò)84消毒液浸泡和凈水清洗后再使用。
（2）應(yīng)當(dāng)設(shè)置野生型小鼠的對(duì)照。
（3）PCR的退火溫度可根據(jù)引物的預(yù)測(cè)Tm值減去5oC，或者通過(guò)梯度PCR摸索較佳退火溫度。
（4）TaqMix中加入了染料和相應(yīng)試劑，PCR后可直接進(jìn)行電泳，無(wú)需另加Loading buffer。
A129小鼠（JAX number：010830）的鑒定。取2mm鼠尾，用EZ011試劑盒進(jìn)行直接擴(kuò)增，A129小鼠出現(xiàn)250bp條帶，而野生小鼠呈現(xiàn)155bp條帶，說(shuō)明該小鼠為純合的突變子。
SYISL缺失小鼠（PNAS，2018）的鑒定。取2mm鼠尾，用EZ011試劑盒進(jìn)行直接擴(kuò)增，野生小鼠出現(xiàn)1500bp條帶，SYISL缺失小鼠出現(xiàn)455bp條帶，說(shuō)明該小鼠為純合的突變子。
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