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DH5 aλpir感受態(tài)細胞*
產(chǎn)品貨名：DH5αλpir Chemically Competent Cell
產(chǎn)品貨號：G6018-10(10支100ul)、G6018-100(100支100ul)
規(guī)格/簡介：G6018-10(10支100ul)、G6018-100(100支100ul)
基因型
F- φ80 lac Z△M15△(lacZYA- -arg F) LAMpir U169 endA1
recAl hsdR17(rk- ， mk+) supE44 λ- thi -1 gyrA96 relAl phoA
簡要說明|
CLBio DH5a入pir 菌株來源于DH5a，在DH5a大腸桿菌基因組中引入LAMpir，即為DH5a入pir，該菌株可以表達PIR蛋白，使得含有R6Kg ori 復(fù)制子的質(zhì)粒可以在其中正常復(fù)制。DH5a入pir 菌株缺失核酸內(nèi)切酶(endA)，提高了質(zhì)粒DNA的產(chǎn)量和質(zhì)量;重組酶缺陷型(recA)減少插入片段的同源重組概率，保證了插入DNA的穩(wěn)定性; lacZOM15 的存在使DH5a可用于藍、白斑篩選;但DH5a入pir 菌株生長速度較慢，在平板培養(yǎng)或液體搖菌時應(yīng)延長生長時間。CLBio DH5a λpir感受態(tài)細胞經(jīng)特殊工藝制作，pUC19質(zhì)粒檢測轉(zhuǎn)化效率>1X109 cfu/ μg DNA。
操作說明：
1. DH5a λpir 感受態(tài)細胞從-80°C拿出，迅速插入冰中，5分鐘后待菌塊融化，加入目的DNA (質(zhì)粒或連接產(chǎn)物)并用手打EP管底混勻，冰中靜置25分鐘。
2.42*C水浴熱激45秒，迅速放回冰.上并靜置2分鐘，晃動會降低轉(zhuǎn)化效率。
3.向離心管中加入700 μ1不含抗生素的無菌LB培養(yǎng)基，混勻后37°C，200 rpm復(fù)蘇70分鐘。
4. 5000 rpm離心1分鐘收集菌體，留取100 μl左右上清輕輕吹打重懇菌塊并涂布到含相應(yīng)抗生素的LB培養(yǎng)基上。
5.將平板倒置放于37°C培養(yǎng)箱至少18小時。
注意事項：
1.感受態(tài)細胞建議在冰中緩慢融化。插入冰中8分鐘內(nèi)加入目標(biāo)DNA,不可在冰中放置時間過長，長時間存放會降低轉(zhuǎn)化效率。
2.DH5aλpir菌株生長緩慢，在平板上培養(yǎng)或液體搖菌時應(yīng)延長菌體生長時間(37°C， 18 小時以上)。
3.轉(zhuǎn)化高濃度的質(zhì)?；蚋咝实倪B接產(chǎn)物可相應(yīng)減少終用于涂板的菌量。
DH5 aλpir感受態(tài)細胞*
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