脂蛋白脂酶(LPL)活性測定試劑盒，高靈敏度，快速定量分析

甘油三酯（TAG）是血液中的一種脂質(zhì)，作為能量來源，并在代謝中發(fā)揮關(guān)鍵作用。甘油三酯是消化過程中分解膳食脂肪的最終產(chǎn)物。任何未被立即使用的多余碳水化合物和脂肪都會化學(xué)轉(zhuǎn)化為甘油三酯。在腸道中，分泌的酶脂肪酶水解甘油三酯的酯鍵，產(chǎn)生甘油和游離脂肪酸，這一過程稱為脂肪分解。腸上皮細(xì)胞隨后吸收并重新包裝這些片段，并與膽固醇結(jié)合形成乳糜微粒，一種主要的脂蛋白運輸顆粒。在肝臟中，肝脂肪酶也會分解甘油三酯，以從甘油三酯、膽固醇和載脂蛋白中組裝另一種脂蛋白顆粒（VLDL）。血漿甘油三酯水平通過VLDL和乳糜微粒顆粒的組裝和降解來調(diào)節(jié)。脂蛋白脂肪酶（LPL）是負(fù)責(zé)水解這些顆粒中甘油三酯核心的關(guān)鍵血漿脂肪酶。

艾美捷脂蛋白脂酶(LPL)活性測定試劑盒（#STA-610）利用一種熒光甘油三酯類似物作為脂肪酶底物。當(dāng)未被水解時，底物保持在非熒光、猝滅狀態(tài)；然而，當(dāng)在sn-1位置被LPL水解時，會產(chǎn)生一種可被熒光微孔板讀取器測量的熒光產(chǎn)物（激發(fā)波長480-485納米/發(fā)射波長515-525納米，建議截止波長495納米）（見測定原理）。脂蛋白脂肪酶（LPL）活性測定試劑盒是一種簡單的熒光測定法，可在96孔微孔板格式中定量測量血漿、血清和裂解液中的LPL活性。每套試劑盒提供的試劑足以進行多達100次測定，包括空白、LPL標(biāo)準(zhǔn)品和未知樣本。試劑盒包含LPL標(biāo)準(zhǔn)品，檢測靈敏度限為約1毫單位/毫升（見試劑盒組成中的單位定義）。除了LPL，該測定還可用于檢測內(nèi)皮脂肪酶和肝脂肪酶活性。

相關(guān)產(chǎn)品：

1. STA-375：尿酸/尿酸酶測定試劑盒

2. STA-390：總膽固醇測定試劑盒

3. STA-391：HDL和LDL/VLDL膽固醇測定試劑盒

4. STA-397：血清甘油三酯定量試劑盒（熒光法）

5. STA-399：游離甘油測定試劑盒（熒光法）

脂蛋白脂酶(LPL)活性測定試劑盒組成（干冰運輸）：

1. LPL熒光底物（部件編號261001）：一個20微升琥珀色試管。

2. 10倍LPL測定緩沖液（部件編號261002）：兩個1.5毫升試管。

 注意：該緩沖液不含鈣或鎂。

3. 終止液（部件編號261003）：兩個1.5毫升試管。

4. LPL酶標(biāo)準(zhǔn)品（部件編號261004）：一個25微升試管，濃度為2500單位/毫升。

 注意：一個單位對應(yīng)于在pH 8.0和40攝氏度下，使用三油酸甘油酯作為底物時，每分鐘釋放1微摩爾油酸的酶量。

未提供的材料：

1. 標(biāo)準(zhǔn)96孔熒光黑色微孔板

2. 37攝氏度培養(yǎng)箱

3. 配備激發(fā)濾光片（480-485納米）和發(fā)射濾光片（515-525納米）的熒光微孔板讀取器（建議截止波長495納米）

儲存條件：

將整個試劑盒儲存于-80攝氏度。通過分裝避免反復(fù)凍融。LPL熒光底物對光敏感，應(yīng)保存在琥珀色試管中。

試劑準(zhǔn)備：

- 1倍LPL測定緩沖液：用去離子水將10倍LPL測定緩沖液稀釋至1倍。攪拌至均勻。

- LPL熒光底物：在測定準(zhǔn)備期間，將LPL熒光底物在室溫下解凍。使用前，用1倍LPL測定緩沖液將LPL熒光底物稀釋1:500。短暫渦旋至均勻。不要儲存稀釋后的溶液。

 注意：對于長期儲存，LPL熒光底物應(yīng)分裝并冷凍于-80攝氏度，以避免反復(fù)凍融。

- 終止液：在37攝氏度下解凍終止液。對于長期儲存，終止液可在室溫或4攝氏度下保存。如果出現(xiàn)結(jié)晶，可在37攝氏度下短暫加熱溶液以重新溶解。

樣本準(zhǔn)備：

- 血漿：用抗凝劑（如肝素、檸檬酸鹽或EDTA）收集血液，并通過倒置混合。在4攝氏度下以1000×g離心10分鐘。收集血漿上清液，避免干擾白色白細(xì)胞層。樣本應(yīng)立即檢測或在-80攝氏度下冷凍保存，最長可達1個月。在測定前，血漿必須用1倍LPL測定緩沖液稀釋1:50至1:200。

- 血清：在無抗凝劑的試管中收集血液。讓血液在室溫下凝固30分鐘。以2500×g離心20分鐘。小心移除黃色血清上清液，避免干擾白色白細(xì)胞層。樣本應(yīng)立即檢測或在-80攝氏度下冷凍保存，最長可達1個月。在測定前，血清必須用1倍LPL測定緩沖液稀釋1:50至1:200。

- 細(xì)胞裂解液：通過以1000×g離心10分鐘收集10×10?個細(xì)胞。棄去上清液，用1毫升冷20毫摩爾/升Tris（pH 7.5）、150毫摩爾/升氯化鈉重懸細(xì)胞。勻漿或超聲處理細(xì)胞懸浮液。在4攝氏度下以10,000×g離心10分鐘。小心收集上清液，置于冰上以供即時使用。對于長期儲存，將裂解液在-80攝氏度下冷凍保存，最長可達1個月。在測定前，細(xì)胞裂解液必須用1倍LPL測定緩沖液進一步稀釋1:20或更高。

- 組織樣本：稱取200毫克組織并切成小塊。用冷PBS沖洗組織以去除紅細(xì)胞和x塊。在1毫升冷20毫摩爾/升Tris（pH 7.5）、150毫摩爾/升氯化鈉中勻漿處理切碎的組織。在4攝氏度下以10,000×g離心10分鐘。小心收集上清液，置于冰上以供即時使用。對于長期儲存，將勻漿在-80攝氏度下冷凍保存，最長可達1個月。在測定前，細(xì)胞裂解液必須用1倍LPL測定緩沖液進一步稀釋1:100或更高。

結(jié)果示例：

下圖展示了典型的LPL活性測定試劑盒結(jié)果。使用SpectraMax Gemini XS熒光光度計（Molecular Devices）在485/525納米濾光片組和495納米截止波長下進行熒光測量。以下數(shù)據(jù)僅供參考，不應(yīng)用于解釋實際結(jié)果。  

脂蛋白脂肪酶標(biāo)準(zhǔn)曲線

脂蛋白脂酶(LPL)活性測定試劑盒文獻參考：

1. Goldberg, I. J., and M. Merkel (2001) Front Biosci 6: D388-405.

2. Olivecrona, G., and T. Olivecrona (2010) Curr Opin Lipidol 21: 409-415.

3. Wang, H., and R. H. Eckel (2009) Am J Physiol Endocrinol Metab 297: E271-288.