高通量細(xì)胞失巢凋亡檢測：CytoSelect 24孔板細(xì)胞失巢凋亡分析試劑盒方案

細(xì)胞與細(xì)胞外基質(zhì)（ECM）的黏附對于許多貼壁細(xì)胞的生存和增殖至關(guān)重要。細(xì)胞失去與ECM的黏附或黏附不適當(dāng)所導(dǎo)致的凋亡被稱為“失巢凋亡"（anoikis）。失巢凋亡一詞來源于希臘語，意為“無家可歸"，它參與了組織更新和細(xì)胞穩(wěn)態(tài)的生理過程。

癌細(xì)胞發(fā)展和生長的一個共同特征是轉(zhuǎn)化細(xì)胞能夠在“無錨定"或“球體"生長條件下存活。這種對失巢凋亡的抵抗已被證明與細(xì)胞穩(wěn)態(tài)的喪失、癌癥生長和轉(zhuǎn)移有關(guān)。抑制細(xì)胞在ECM上的黏附、擴(kuò)散和生長會阻礙細(xì)胞愈合過程，因此它可能是一個潛在的治療靶點(diǎn)。防止失巢凋亡并增強(qiáng)細(xì)胞黏附和擴(kuò)散是細(xì)胞移植技術(shù)開發(fā)的主要目標(biāo)，包括祖細(xì)胞的治療應(yīng)用。進(jìn)一步研究旨在控制失巢凋亡抵抗的分子機(jī)制，將有助于定義治療多種人類惡性腫瘤的有效療法。

CytoSelect™ 24孔失巢凋亡試劑盒提供比色法和熒光法格式，用于測量無錨定生長并監(jiān)測失巢凋亡誘導(dǎo)的細(xì)胞死亡。試劑盒包含足夠的試劑，可在涂有聚Q乙基甲基丙烯酸酯（Poly-Hema）的24孔板中檢測24個樣本。活細(xì)胞通過MTT或Calcein AM檢測。細(xì)胞死亡通過乙錠均聚物（EthD-1）檢測。

艾美捷CytoSelect 24孔板細(xì)胞失巢凋亡分析試劑盒（比色法/熒光法）（#CBA-080）測定原理：

細(xì)胞在聚Q乙基甲基丙烯酸酯（Poly-Hema）涂層板或?qū)φ瞻逯信囵B(yǎng)。通過MTT或Calcein AM測定細(xì)胞活性。通過乙錠均聚物（EthD-1）測定失巢凋亡誘導(dǎo)的細(xì)胞死亡。EthD-1是檢測死亡細(xì)胞的很好的標(biāo)記物。EthD-1是一種紅色熒光染料，只能穿透受損的細(xì)胞膜。EthD-1在結(jié)合單鏈DNA、雙鏈DNA、RNA、寡核苷酸和三鏈DNA時，熒光強(qiáng)度會增強(qiáng)40倍。由于這些染料在與細(xì)胞相互作用之前幾乎不具有熒光，因此背景熒光水平非常低。

相關(guān)產(chǎn)品：

1. CBA-081：CytoSelect™ 96孔失巢凋亡試劑盒

2. CBA-230：細(xì)胞衰老檢測試劑盒（SA-β-半乳糖苷酶染色）

3. CBA-231：96孔細(xì)胞衰老測定試劑盒（SA β-半乳糖苷酶活性）

4. CBA-232：定量細(xì)胞衰老測定試劑盒（SA β-半乳糖苷酶）

5. CBA-240：CytoSelect™細(xì)胞活性和細(xì)胞毒性測定試劑盒

CytoSelect 24孔板細(xì)胞失巢凋亡分析試劑盒組成（室溫運(yùn)輸）：

1. 無錨定抗性板（部件編號108001）：一個24孔聚Q乙基甲基丙烯酸酯（Poly-Hema）涂層板。

2. Calcein AM（500倍）（部件編號108002）：一瓶——50微升，溶于DMSO。

3. 乙錠均聚物（EthD-1）（500倍）（部件編號108003）：一瓶——50微升。

4. 洗滌劑溶液（部件編號108004）：一瓶——25.0毫升。

5. MTT溶液（部件編號113502）：三個試管——每個1.0毫升。

未提供的材料：

1. 用于測定失巢凋亡的細(xì)胞

2. 細(xì)胞培養(yǎng)基

3. 倒置熒光/光學(xué)顯微鏡

4. 能夠讀取Calcein AM（485納米/515納米）和EthD-1（525納米/590納米）熒光的熒光光度計

儲存條件：

將Calcein AM和乙錠均聚物儲存于-20攝氏度。將所有其他組分儲存于4攝氏度。

結(jié)果示例：

下圖展示了使用CytoSelect™ 24孔失巢凋亡試劑盒的典型結(jié)果。以下數(shù)據(jù)僅供參考，不應(yīng)用于解釋實(shí)際結(jié)果。

圖：人包皮成纖維細(xì)胞BJ-TERT細(xì)胞的失巢凋亡測定。將BJ-TERT細(xì)胞以每孔50,000個細(xì)胞的密度接種到組織培養(yǎng)對照板或聚Q乙基甲基丙烯酸酯（Poly-Hema）涂層板中。細(xì)胞培養(yǎng)24小時后，通過MTT和Calcein AM測定細(xì)胞活性，而類似失巢凋亡的細(xì)胞死亡則用EthD-1染色。

CytoSelect 24孔板細(xì)胞失巢凋亡分析試劑盒文獻(xiàn)參考：

1. Bates RC, Buret A, van Helden DF, Horton MA, Burns GF. (1994) J Cell Biol 125, 403-415.

2. Frisch SM, Francis H. (1994) J Cell Biol 124, 619-626.

3. Frisch SM, Screaton RA. (2001) Curr Opin Cell Biol 13, 555-562.

4. Meredith JE, Jr Fazeli B, Schwartz MA. (1993) Mol Biol Cell 4, 953-961.

5. Rak J, Mitsuhashi Y, Erdos V, Huang SN, Filmus J, Kerbel RS. (1995) J Cell Biol 131, 1587-1598.