乙醇測(cè)定試劑盒，操作簡(jiǎn)便、結(jié)果可靠

乙醇在人體內(nèi)參與多種代謝途徑。攝入后，乙醇主要在肝臟通過(guò)氧化代謝進(jìn)行代謝，涉及乙醇脫氫酶和乙醛脫氫酶，將乙醇轉(zhuǎn)化為有毒的乙醛，再進(jìn)一步轉(zhuǎn)化為乙酸，最終生成二氧化碳和水。乙醇代謝影響能量平衡和營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的利用。乙醇的代謝優(yōu)先于其他宏量營(yíng)養(yǎng)素，導(dǎo)致過(guò)量的碳水化合物和脂肪儲(chǔ)存。長(zhǎng)期飲酒會(huì)破壞代謝途徑，影響肝臟功能、脂質(zhì)代謝和血糖調(diào)節(jié)。AkrivisBio的乙醇檢測(cè)試劑盒提供了一種簡(jiǎn)單、靈敏的乙醇測(cè)量方法，適用于多種樣本。在檢測(cè)中，乙醇氧化酶將乙醇氧化生成過(guò)氧化氫（H?O?），隨后用于形成具有強(qiáng)烈顏色和熒光的熒光素，檢測(cè)靈敏度可達(dá)0.05納摩爾。

艾美捷乙醇測(cè)定試劑盒：

貨號(hào)：MA-0131

規(guī)格：100孔

樣本類型：血清、血漿、細(xì)胞裂解液、組織提取液、細(xì)胞培養(yǎng)上清液、尿液

適用物種：通用（適用于所有物種）

檢測(cè)方法：比色法（檢測(cè)波長(zhǎng)570納米）或熒光法（激發(fā)/發(fā)射波長(zhǎng)=535/580納米）

檢測(cè)類型：定量

應(yīng)用：基于微孔板的比色法/熒光法檢測(cè)，用于測(cè)量多種樣本中的乙醇濃度。

靈敏度：0.05納摩爾

儲(chǔ)存條件：-20°C

運(yùn)輸條件：凝膠冷藏包

乙醇測(cè)定試劑盒檢測(cè)組分：

-檢測(cè)緩沖液：25毫升，貨號(hào)WMMA-0131A

-ADHP溶液：200微升，紅色，貨號(hào)MA-0131B

-乙醇氧化酶/過(guò)氧化物酶：凍干粉，綠色，貨號(hào)MA-0131C

-乙醇標(biāo)準(zhǔn)品（40mM）：0.2毫升，黃色，貨號(hào)MA-0131D

乙醇測(cè)定試劑盒檢測(cè)原理：

1.乙醇被乙醇氧化酶氧化，生成乙醛和過(guò)氧化氫。

2.過(guò)氧化物酶利用過(guò)氧化氫將ADHP氧化為熒光素，產(chǎn)生顏色和熒光。

注意：空氣中的乙醇會(huì)對(duì)檢測(cè)性能產(chǎn)生不利影響。檢測(cè)必須在w全無(wú)乙醇的環(huán)境中進(jìn)行。

儲(chǔ)存和處理：在使用前將試劑盒儲(chǔ)存于-20°C。使用前將檢測(cè)組分恢復(fù)至室溫。打開試劑瓶前請(qǐng)短暫離心。

-檢測(cè)緩沖液：直接使用，儲(chǔ)存于4°C。不使用時(shí)請(qǐng)緊密封閉。

-ADHP溶液：直接使用，儲(chǔ)存于-20°C。

-乙醇氧化酶/過(guò)氧化物酶：向酶混合物中加入220微升檢測(cè)緩沖液。儲(chǔ)存于4°C。

-乙醇標(biāo)準(zhǔn)品：直接使用，儲(chǔ)存于-20°C。僅在取樣時(shí)打開，不使用時(shí)請(qǐng)緊密封閉。

檢測(cè)步驟：

1.標(biāo)準(zhǔn)曲線：

-a.比色法檢測(cè)：將10微升乙醇標(biāo)準(zhǔn)品轉(zhuǎn)移至990微升檢測(cè)緩沖液中，混合均勻，配制成0.4mM的工作溶液。將0、5、10、15、20、25微升的工作溶液分別轉(zhuǎn)移至96孔板的多個(gè)孔中，用檢測(cè)緩沖液將所有孔的體積調(diào)整至50微升，得到每孔0、2、4、6、8、10納摩爾的乙醇標(biāo)準(zhǔn)系列。

-b.熒光法檢測(cè)：按照比色法檢測(cè)稀釋標(biāo)準(zhǔn)品，然后將10微升轉(zhuǎn)移至190微升檢測(cè)緩沖液中，配制成20微摩爾的工作溶液。將0、5、10、15、20、25微升的工作溶液分別轉(zhuǎn)移至96孔板的多個(gè)孔中，用檢測(cè)緩沖液將所有孔的體積調(diào)整至50微升，得到每孔0、100、200、300、400、500皮摩爾的乙醇標(biāo)準(zhǔn)系列。

2.樣本準(zhǔn)備：所有樣本讀數(shù)必須在標(biāo)準(zhǔn)曲線范圍內(nèi)，并應(yīng)相應(yīng)準(zhǔn)備。液體樣本可以直接使用或用檢測(cè)緩沖液稀釋后測(cè)試。血清應(yīng)稀釋約10-100倍。將所有孔的體積調(diào)整至50微升。

-注意：純乙醇約為17M。酒精濃度為3%（約0.5M）至14%（2.4M）的酒j飲料需要稀釋1000倍或更多。

3.啟動(dòng)反應(yīng)：每個(gè)反應(yīng)需要50微升反應(yīng)混合液。

4.測(cè)量：在570納米（比色法檢測(cè)）或激發(fā)波長(zhǎng)535納米/發(fā)射波長(zhǎng)580納米處監(jiān)測(cè)反應(yīng)，室溫下持續(xù)60分鐘。

5.典型結(jié)果：

6.計(jì)算：

-從所有其他標(biāo)準(zhǔn)品和樣本中減去零乙醇背景值（背景信號(hào)超過(guò)約0.1OD表明空氣中存在微量乙醇。背景讀數(shù)可能較大，必須從樣本讀數(shù)中減去。可以容忍高達(dá)0.5OD的背景）。繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。確定標(biāo)準(zhǔn)曲線的斜率。將背景校正后的樣本值除以標(biāo)準(zhǔn)曲線的斜率，以獲得孔中的乙醇納摩爾數(shù)。將孔中的乙醇納摩爾數(shù)除以加入孔中的樣本體積（微升）=樣本中的乙醇納摩爾數(shù)/微升。如果樣本來(lái)自組織或細(xì)胞，將樣本中的乙醇納摩爾數(shù)/微升乘以樣本總體積，再除以用于制備樣本的組織毫克數(shù)或細(xì)胞數(shù)量=每毫克組織（或每細(xì)胞數(shù)量等）中的乙醇納摩爾數(shù)。