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日本生研 莢膜型肺炎鏈球菌診斷血清39支套裝
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1、溶解包涵體的能力不同。尿素和鹽酸胍屬中強(qiáng)度變性劑,它們對(duì)包涵體氫鍵有較強(qiáng)的可逆性變性作用,但尿素溶解包涵體的能力較鹽酸胍慢而弱。所需濃度尿素常為8M,8M尿素對(duì)大約三分之一種類的蛋白包涵體溶解效果較差,溶解能力為70-90%;鹽酸胍常為6M,6M鹽酸胍+DTT能溶絕大多數(shù)包涵體,溶解能力達(dá)95%以上。在室溫下4~6mol/L尿素或3~4mol/L鹽酸胍,可使球狀蛋白質(zhì)從天然狀態(tài)轉(zhuǎn)變?yōu)樽冃誀顟B(tài)的中點(diǎn)。增加變性劑濃度可提高變性程度,通常8mol/L尿素或約6mol/L鹽酸胍可以使蛋白質(zhì)*轉(zhuǎn)變?yōu)樽冃誀顟B(tài)。鹽酸胍由于具有離子特性,因而比尿素的變性能力強(qiáng)。有一些蛋白質(zhì),在8mol/L尿素溶液中也不能*變性,但是在8mol/L鹽酸胍溶液中,它們一般以無(wú)規(guī)卷曲(*變性)構(gòu)象狀態(tài)存在。
2、尿素可能會(huì)對(duì)蛋白質(zhì)的氨基進(jìn)行共價(jià)修飾,使一些氨基酸殘基?;?。8M尿素溶解的包涵體溶液在低溫,如4℃可以較長(zhǎng)期放置,甚至放置半個(gè)月也不會(huì)有太大影響。但在室溫放置超過(guò)24小時(shí),就可能會(huì)對(duì)目的蛋白有影響,因?yàn)槟蛩卦谧饔脮r(shí)間較長(zhǎng)或溫度較高時(shí)會(huì)裂解形成氰酸鹽,對(duì)重組蛋白質(zhì)的氨基進(jìn)行共價(jià)修飾,使一些氨基酸殘基酰基化,從而可能會(huì)影響到復(fù)性蛋白質(zhì)的生物學(xué)活性。