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Edu染色服務(wù)：實(shí)驗(yàn)步驟

1.將處于對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的各實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞**消化后，培養(yǎng)基重懸成細(xì)胞懸液，并計(jì)數(shù)。

2.根據(jù)細(xì)胞生長(zhǎng)快慢決定鋪板細(xì)胞密度，每組3-5重復(fù)，根據(jù)實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)決定鋪板數(shù)量。

3.統(tǒng)一鋪好后，待細(xì)胞沉淀下來(lái)后，在顯微鏡下觀察各實(shí)驗(yàn)組的細(xì)胞密度，如果密度不均勻，則固定一組，微調(diào)其他組細(xì)胞的量再次鋪板(如:發(fā)現(xiàn)NC組細(xì)胞較多，降低細(xì)胞量再次鋪板)，放入細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

4.鋪板后第一天與第四天，配制2X(20uM)的EDU工作液,將37℃預(yù)熱的2X的EDU工作液等體積加入96孔板中，是EDU終濃度變?yōu)?X，繼續(xù)孵育細(xì)胞2小時(shí)，EDU標(biāo)記細(xì)胞完成后，去除培養(yǎng)液，并加入1mL固定液，室溫固定15分鐘，去除固定液，每孔用1mL洗滌液洗滌細(xì)胞3次，每次3-5分鐘，去除洗滌液，每孔用1mL通透液，室溫孵育10-15分鐘，去除通透液，每孔用1mL洗滌液洗滌細(xì)細(xì)胞1-2次，每次3-5分鐘。用內(nèi)源性過(guò)氧化物酶封閉液室溫孵育20分鐘，用洗滌液洗滌3次，每次3-5分鐘。

5.EDU檢測(cè):每孔加入50uL的Click反應(yīng)液，室溫避光孵育30分鐘，吸出反應(yīng)液，用洗滌液洗滌3次，每次3-5分鐘。

6.樣品的顯色 :在樣品上加Streptavidin-HRP工作液，室溫孵育30分鐘。 用洗滌液洗滌3次，每次2分鐘。加入0.1ml TMB顯色液，室溫孵育5-30分鐘或根據(jù)顯色情況孵育適當(dāng)時(shí)間。直接在370nm或620-650nm測(cè)定吸光度。或加入25微升2M 終止反應(yīng)，隨后在450nm測(cè)定吸光度。

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伊萊博生物科技（上海）有限公司，公司總部位于上海長(zhǎng)江軟件園。2022年1月與上海交通大學(xué)藥學(xué)院成立聯(lián)合研究中心，主要以生命科學(xué)研究為基礎(chǔ)，專(zhuān)注于研究成果轉(zhuǎn)化及技術(shù)服務(wù)創(chuàng)新，建立了包含腫瘤生物學(xué)、病理學(xué)、免疫學(xué)、細(xì)胞生物學(xué)、生物化學(xué)與分子生物學(xué)以及動(dòng)物實(shí)驗(yàn)等學(xué)科的研究服務(wù)體系，為醫(yī)學(xué)領(lǐng)域的發(fā)展做出了重要貢獻(xiàn)。