BW25113 化轉(zhuǎn)克隆感受態(tài)

BW25113 化轉(zhuǎn)克隆感受態(tài)菌株來源于 ，是 K12 的衍生菌株，與 MG1655 類似，也是一種經(jīng)過較 少改造，比較接近于“野生型"的大腸桿菌工程菌株。 作為母系菌株，可以用來制作 E. coli Keio Knockout 文庫；同時(shí)可作為大腸桿菌模式菌株使用，用來制作各種基因的 Knockout 突變體

BW25113 化轉(zhuǎn)克隆感受態(tài)

產(chǎn)品簡介

菌株來源于 ，是 K12 的衍生菌株，與 MG1655 類似，也是一種經(jīng)過較

少改造，比較接近于“野生型”的大腸桿菌工程菌株。 作為母系菌株，可以用來制作 E. coli

Keio Knockout 文庫；同時(shí)可作為大腸桿菌模式菌株使用，用來制作各種基因的 Knockout 突變體。 可用于構(gòu)建、擴(kuò)增質(zhì)粒使用，但是不含核酸酶 endA1 突變，因此體內(nèi)核酸酶含量

較高，提取質(zhì)粒時(shí)務(wù)必使用質(zhì)粒提取試劑盒中去蛋白液盡量去除核酸酶，以防提取的質(zhì)粒被降解。

感受態(tài)細(xì)胞經(jīng)特殊工藝制作，pUC18 質(zhì)粒檢測轉(zhuǎn)化效率>108 cfu/μg DNA。

產(chǎn)品組成

組分

CC96162-01

CC96162-02

CC96162-03

BW25113 化轉(zhuǎn)克隆感受態(tài)

10 × 100 μL

100 × 100 μL

定制

基因型：F-, DE(araD-araB)567, lacZ4787(del)::rrnB-3, LAM-, rph-1, DE(rhaD-rhaB)568, hsdR514

存儲(chǔ)條件

-80 ℃保存；請勿將本品置于-20 ℃或者液氮中保存。

質(zhì)量控制

無外源質(zhì)粒 DNA 殘留；

化學(xué)法轉(zhuǎn)化效率≥108 cfu/μg pUC18 DNA。

BW25113 化轉(zhuǎn)克隆感受態(tài)

使用方法

1. 將感受態(tài)細(xì)胞從-80 ℃中取出，置于冰水浴中融化；

2. 將待轉(zhuǎn)化 DNA 加入到 100μL 感受態(tài)細(xì)胞中，輕輕彈勻，冰上孵育 30min；

3. 將離心管置于 42 ℃水浴鍋中，不要晃動(dòng)，熱激 90s 后，立刻置于冰水浴中靜置 2-3 min；

4. 向離心管中加入 900μL LB 或 SOC 培養(yǎng)基（室溫或 37 ℃預(yù)熱），然后置于 37 ℃搖床復(fù)壯 45 min；

5. 取不同體積的轉(zhuǎn)化產(chǎn)物，用無菌涂布棒均勻涂布于正確抗性的平板上，于 37 ℃培養(yǎng)箱培養(yǎng)過夜。

注意事項(xiàng)

1. 感受態(tài)細(xì)胞冰水浴中解凍后應(yīng)立即使用；

2. 加入的待轉(zhuǎn)化 DNA 的總體積不應(yīng)超過感受態(tài)細(xì)胞體積的 1/10；

3. 加入待轉(zhuǎn)化 DNA 后，不要用移液器吹吸感受態(tài)細(xì)胞，僅用手指輕彈即可；

4. 為確保.高轉(zhuǎn)化效率，整個(gè)操作過程中除熱激外均要保持低溫，并且要盡量輕柔。