DH10化轉克隆感受態(tài)

DH10化轉克隆感受態(tài)
產(chǎn)品簡介本品為使用大腸桿菌 DH10B 菌株制備的高效化學感受態(tài)細胞，轉化效率可達 108 cfu/μg DNA，被廣泛用于質(zhì)粒轉化、基因克隆等；可以使用藍白斑篩選。本品為使用大腸桿菌 DH10B 菌株制備的高效化學感受態(tài)細胞，轉化效率可達 108 cfu/μg DNA，被廣
泛用于質(zhì)粒轉化、基因克隆等；可以使用藍白斑篩選。

DH10化轉克隆感受態(tài)

產(chǎn)品簡介

本品為使用大腸桿菌 DH10B 菌株制備的高效化學感受態(tài)細胞，轉化效率可達 108 cfu/μg DNA，被廣

泛用于質(zhì)粒轉化、基因克隆等；可以使用藍白斑篩選。

產(chǎn)品組成

組分

CC96101-01

CC96101-02

CC96101-03

DH10B 感受態(tài)細胞

10 × 100 μL

100 × 100 μL

定制

基因型：F- mcrA ?(mrr-hsdRMS-mcrBC) φ80lacZ?M15 ?lacX74 recA1 endA1 araD139 ?(ara, leu)7697

galE15 galK λ- rpsL nupG

DH10化轉克隆感受態(tài)

存儲條件

-80 ℃保存；請勿將本品置于-20 ℃或者液氮中保存。

產(chǎn)品特性

-來源于 MC1061 菌株，可用于基因克隆等；

-rpsL 突變賦予 DH10B 菌株鏈霉素抗性；

-藍白斑篩選時，需在平板上預先涂布 IPTG 和 X-gal；

-mcrA、mcrBC 及 mrr 突變使 DH10B 菌株適合于克隆富含甲基胞嘧啶或甲基腺嘌呤的 DNA ；

-由于 recA1 和 endA1 的突變，因此該菌株的重組率較低，有利于插入 DNA 的穩(wěn)定，故常用于克隆

質(zhì)粒的保存和高純度質(zhì)粒 DNA 的提取。

質(zhì)量控制

無外源質(zhì)粒 DNA 殘留；

化學法轉化效率≥108 cfu/μg pUC18 DNA。

DH10化轉克隆感受態(tài)

使用方法

1. 將感受態(tài)細胞從-80 ℃中取出，置于冰水浴中融化；

2. 將待轉化 DNA 加入到 100 μL 感受態(tài)細胞中，輕輕彈勻，冰上孵育 30 min；

3. 將離心管置于 42 ℃水浴鍋中，不要晃動，熱激 90 s 后，立刻置于冰水浴中靜置 2-3 min；

4. 向離心管中加入900 μL LB或SOC培養(yǎng)基（室溫或37 ℃預熱），然后置于37 ℃搖床復壯45 min；

5. 取不同體積的轉化產(chǎn)物，用無菌涂布棒均勻涂布于正確抗性的平板上，于 37 ℃培養(yǎng)箱培養(yǎng)過夜。

注意事項

1. 感受態(tài)細胞冰水浴中解凍后應立即使用；

2. 加入的待轉化 DNA 的總體積不應超過感受態(tài)細胞體積的 1/10；

3. 加入待轉化 DNA 后，不要用移液器吹吸感受態(tài)細胞，僅用手指輕彈即可；

4. 為確保.高轉化效率，整個操作過程中除熱激外均要保持低溫，并且要盡量輕柔。

產(chǎn)品簡介

本品為使用大腸桿菌 DH10B 菌株制備的高效化學感受態(tài)細胞，轉化效率可達 108 cfu/μg DNA，被廣

泛用于質(zhì)粒轉化、基因克隆等；可以使用藍白斑篩選。

產(chǎn)品組成

組分

CC96101-01

CC96101-02

CC96101-03

DH10B 感受態(tài)細胞

10 × 100 μL

100 × 100 μL

定制

基因型：F- mcrA ?(mrr-hsdRMS-mcrBC) φ80lacZ?M15 ?lacX74 recA1 endA1 araD139 ?(ara, leu)7697

galE15 galK λ- rpsL nupG

存儲條件

-80 ℃保存；請勿將本品置于-20 ℃或者液氮中保存。

產(chǎn)品特性

-來源于 MC1061 菌株，可用于基因克隆等；

-rpsL 突變賦予 DH10B 菌株鏈霉素抗性；

-藍白斑篩選時，需在平板上預先涂布 IPTG 和 X-gal；

-mcrA、mcrBC 及 mrr 突變使 DH10B 菌株適合于克隆富含甲基胞嘧啶或甲基腺嘌呤的 DNA ；

-由于 recA1 和 endA1 的突變，因此該菌株的重組率較低，有利于插入 DNA 的穩(wěn)定，故常用于克隆

質(zhì)粒的保存和高純度質(zhì)粒 DNA 的提取。

質(zhì)量控制

無外源質(zhì)粒 DNA 殘留；

化學法轉化效率≥108 cfu/μg pUC18 DNA。

使用方法

1. 將感受態(tài)細胞從-80 ℃中取出，置于冰水浴中融化；

2. 將待轉化 DNA 加入到 100 μL 感受態(tài)細胞中，輕輕彈勻，冰上孵育 30 min；

3. 將離心管置于 42 ℃水浴鍋中，不要晃動，熱激 90 s 后，立刻置于冰水浴中靜置 2-3 min；

4. 向離心管中加入900 μL LB或SOC培養(yǎng)基（室溫或37 ℃預熱），然后置于37 ℃搖床復壯45 min；

5. 取不同體積的轉化產(chǎn)物，用無菌涂布棒均勻涂布于正確抗性的平板上，于 37 ℃培養(yǎng)箱培養(yǎng)過夜。

注意事項

1. 感受態(tài)細胞冰水浴中解凍后應立即使用；

2. 加入的待轉化 DNA 的總體積不應超過感受態(tài)細胞體積的 1/10；

3. 加入待轉化 DNA 后，不要用移液器吹吸感受態(tài)細胞，僅用手指輕彈即可；

4. 為確保.高轉化效率，整個操作過程中除熱激外均要保持低溫，并且要盡量輕柔。