GBred-gyrA462 化轉(zhuǎn)克隆感受態(tài)

GBred-gyrA462 化轉(zhuǎn)克隆感受態(tài)
含有一個(gè)突變的 trfA 基因，該基因表達(dá)出的蛋白產(chǎn)物可以促進(jìn)含有 oriV 復(fù)制子的質(zhì)粒的高拷
貝擴(kuò)繁，誘導(dǎo)劑Ⅰ可以誘導(dǎo) trfA 基因的表達(dá)。當(dāng)含有 oriV 復(fù)制子質(zhì)粒的 EPI300 細(xì)胞在 LB/2YT 或 SOB 培
養(yǎng)基中生長(zhǎng)時(shí)，trfA 基因的表達(dá)被抑制，oriV 復(fù)制子質(zhì)粒的拷貝數(shù)維持在很低的水平含有一個(gè)突變的 trfA 基因，該基

產(chǎn)品簡(jiǎn)介

GBred-gyrA462 化轉(zhuǎn)克隆感受態(tài)

GB05-dir 細(xì)胞含有一個(gè)突變的 trfA 基因，該基因表達(dá)出的蛋白產(chǎn)物可以促進(jìn)含有 oriV 復(fù)制子的質(zhì)粒的高拷

貝擴(kuò)繁，誘導(dǎo)劑Ⅰ可以誘導(dǎo) trfA 基因的表達(dá)。當(dāng)含有 oriV 復(fù)制子質(zhì)粒的 EPI300 細(xì)胞在 LB/2YT 或 SOB 培

養(yǎng)基中生長(zhǎng)時(shí)，trfA 基因的表達(dá)被抑制，oriV 復(fù)制子質(zhì)粒的拷貝數(shù)維持在很低的水平；當(dāng)在培養(yǎng)基中加入

CopyMore 300 誘導(dǎo)劑時(shí)，oriV 復(fù)制子質(zhì)粒的拷貝數(shù)可維持在很高的水平，提高了質(zhì)粒產(chǎn)量。因此，

GB05-dir 菌株可以降低 oriV 復(fù)制子質(zhì)粒的拷貝數(shù)，特別適合于各種不穩(wěn)定 DNA 或毒性基因的克隆。 [mrr

hsdRMS-mcrBC]基因型使 EPI300 菌株適合于克隆富含甲基胞嘧啶或甲基腺嘌呤的 DNA（例如：哺乳動(dòng)物

基因組 DNA）。recA1 和 endA1 的突變有利于插入 DNA 的穩(wěn)定和高純度質(zhì)粒 DNA 的提取。lacZΔM15 標(biāo)

記的

細(xì)胞的轉(zhuǎn)化效率可達(dá) 108 cfu/μg DNA。

GBred-gyrA462 化轉(zhuǎn)克隆感受態(tài)

產(chǎn)品組成

組分

 

EPI400

化學(xué)感受態(tài)細(xì)胞

10 × 100 μL

100 × 100 μL

定制

基因型：F – mcrA ?(mrr-hsdRMS-mcrBC) φ80 lacZ?M15 ?lacX74 recA1 endA1 araD139 ?(ara, leu)7697 galU galK λ– rpsL nupG

trfA dhfr

存儲(chǔ)條件

-80 ℃保存；請(qǐng)勿將本品置于-20 ℃或者液氮中保存。

GBred-gyrA462 化轉(zhuǎn)克隆感受態(tài)

質(zhì)量控制

無外源質(zhì)粒 DNA 殘留；

化學(xué)法轉(zhuǎn)化效率≥108 cfu/μg pUC18 DNA。

使用方法

1. 將感受態(tài)細(xì)胞從-80 ℃中取出，置于冰浴中融化；

2. 將待轉(zhuǎn)化 DNA 加入到 100 μL 感受態(tài)細(xì)胞中，輕輕彈勻，冰上孵育 30 min；

3. 將離心管置于 42 ℃水浴鍋中，不要晃動(dòng)，熱激 90 s 后，立刻置于冰浴中靜置 2-3 min；

4. 向離心管中加入 900 μL LB 或 SOC 培養(yǎng)基（室溫或 37 ℃預(yù)熱），然后置于 37 ℃搖床復(fù)壯 45 min；

5. 取不同體積的轉(zhuǎn)化產(chǎn)物，用無菌涂布棒均勻涂布于正確抗性的平板上，于 37 ℃培養(yǎng)箱培養(yǎng)過夜。

注意事項(xiàng)

1. 感受態(tài)細(xì)胞冰浴中解凍后應(yīng)立即使用；

2. 加入的待轉(zhuǎn)化 DNA 的總體積不應(yīng)超過感受態(tài)細(xì)胞體積的 1/10；

3. 加入待轉(zhuǎn)化 DNA 后，不要用移液器吹吸感受態(tài)細(xì)胞，僅用手指輕彈即可；

4. 為確保.高轉(zhuǎn)化效率，整個(gè)操作過程中除熱激外均要保持低溫，并且要盡量輕柔。