S17-1 λpirr感受態(tài) 技術(shù)新聞

S17-1 λpir：                                                 100μl/支

pUC19 (control vector，10pg/μl):                     10μl

保存條件(保質(zhì)期)：                             -80℃（6個(gè)月） 

基因型

RP4-2(Km::Tn7,Tc::Mu-1), pro-82, LAMpir, recA1, endA1, thiE1, hsdR17, creC510 

產(chǎn)品說明

S17-1 λpir菌株的染色體中整合了RP4-2質(zhì)粒，該質(zhì)?？梢詳y帶染色體的部分DNA在接合菌株之間轉(zhuǎn)移。 S17- 1 λpir菌株缺失核酸內(nèi)切酶 (endA1)，提高了質(zhì)粒DNA的產(chǎn)量和質(zhì)量；同時(shí)為重組酶缺陷型 (recA1)，減少插入片段的同源重組概率，保證了插入DNA 的穩(wěn)定性。Tn7賦予該菌株弱的鏈霉素抗性。唯地生物生產(chǎn)的S17-1 λpir感受態(tài)細(xì)胞經(jīng)特殊工藝制作，pUC19質(zhì)粒檢測轉(zhuǎn)化效率>1×10⁸ cfu/μg DNA。

操作方法

1. S17-1 λpir感受態(tài)細(xì)胞從-80℃拿出，迅速插入冰中，5分鐘后待菌塊融化，加入目的DNA（質(zhì)粒或連接產(chǎn)物）并用手打EP管底輕輕混勻(避免用槍吸打)，冰中靜置25分鐘。

2. 42℃水浴熱激45秒，迅速放回冰上并靜置2分鐘，晃動(dòng)會(huì)降低轉(zhuǎn)化效率。

3. 向離心管中加入700 μl不含抗生素的無菌培養(yǎng)基 (LB)，混勻后37℃，200 rpm復(fù)蘇60分鐘。

4. 5000 rpm離心1分鐘收集菌體，留取100 μl左右上清輕輕吹打重懸菌塊并涂布到含相應(yīng)抗生素的LB培養(yǎng)基上。

5. 將平板倒置放于37℃培養(yǎng)箱過夜培養(yǎng)（12-15 h）。

注意事項(xiàng)

1. 感受態(tài)細(xì)胞在冰中緩慢融化。插入冰中8分鐘內(nèi)加入目標(biāo)DNA，不可在冰中放置時(shí)間過長，長時(shí)間存放會(huì)降低轉(zhuǎn)化效率。

2. 轉(zhuǎn)化高濃度的質(zhì)?；蚋咝实倪B接產(chǎn)物可相應(yīng)減少終用于涂板的菌量。