Turbo感受態(tài) 技術(shù)新聞

Turbo：                                                     100μl/支

pUC19 (control vector，10pg/μl):                   10μl

保存條件(保質(zhì)期)：                            -80℃（6個(gè)月） 

基因型

F' proA⁺B⁺ lacI^qΔlacZM15 / fhuA2 Δ(lac-proAB) glnV galK16 galE15 R(zgb-210::Tn10) Tet^S endA1 thi-1 Δ(hsdS-mcrB)5

產(chǎn)品說明

Turbo菌株是生長的大腸桿菌菌株。平板上6.5小時(shí)可見克隆，營養(yǎng)液中搖菌4-6小時(shí)可提取質(zhì)粒，缺失核酸內(nèi)切酶 (endA)，提高了質(zhì)粒DNA的產(chǎn)量和質(zhì)量；Turbo菌株可嚴(yán)格控制lacl^q的表達(dá)，可以克隆毒性基因；fhuA2突變賦予Turbo菌株對噬菌體T1的抗性；lacZΔM15的存在使Turbo可用于藍(lán)、白斑篩選。Turbo感受態(tài)細(xì)胞經(jīng)特殊工藝制作，pUC19質(zhì)粒檢測轉(zhuǎn)化效率>5×10⁸ cfu/μg DNA。

操作方法

1. Turbo感受態(tài)細(xì)胞從-80℃拿出，迅速插入冰中，5分鐘后待菌塊融化，加入目的DNA（質(zhì)?；蜻B接產(chǎn)物）

并用手打EP管底輕輕混勻(避免用槍吸打)，冰中靜置25分鐘。

2. 42℃水浴熱激45秒，迅速放回冰上并靜置2分鐘，晃動(dòng)會降低轉(zhuǎn)化效率。

3. 向離心管中加入700 μl不含抗生素的無菌培養(yǎng)基 (SOC或LB)，混勻后37℃，200 rpm復(fù)蘇60分鐘。

4. 5000 rpm離心一分鐘收菌，留取100 μl左右上清輕輕吹打重懸菌塊并涂布到含相應(yīng)抗生素的SOC或

LB培養(yǎng)基上。

5. 將平板倒置放于37℃培養(yǎng)6.5小時(shí)以上。

注意事項(xiàng)

1. 感受態(tài)細(xì)胞在冰中緩慢融化。插入冰中8分鐘內(nèi)加入目標(biāo)DNA，不可在冰中放置時(shí)間過長，長時(shí)間存放會降低轉(zhuǎn)化效率。

2. 混入目的DNA時(shí)應(yīng)輕柔操作。

3. 轉(zhuǎn)化高濃度的質(zhì)?；蚋咝实倪B接產(chǎn)物可相應(yīng)減少終用于涂板的菌量。